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主题：【讨论】ELISA试剂盒实验之试剂配置

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hysw
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发表于：2013/11/19 13:32:13 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
ELISA试剂盒被广泛运用与各大实验中，其中关于实验中缓冲溶液等试剂的配制可能对实验新手来说还是个很大的困扰，那么就让我们为您仔细讲解，请用心阅读。
各种ELISA配置方法汇总如下：(1)　ELISA实验包被缓冲液(2)　ELISA实验洗涤缓冲液(2)　ELISA实验洗涤缓冲液(3)　ELISA实验稀释液;(4)ELISA实验终止液(5)ELISA底物缓冲液(6)ELISA实验TMB(四甲基联苯胺)使用液(7)　ELISA实验ABTS使用液(8)ELISC。
试剂
(1)　ELISA实验包被缓冲液(PH9.6 0.05M碳酸盐缓冲液):
NaHCO3    1.59克
NaHCO3　 2.93克
加蒸馏水至1000ml
(2)　ELISA实验洗涤缓冲液(PH7.4 PBS)：0.15M
KH2PO4 　　　　  　0.2克
Na2HPO4·12H2O　　2.9克
NaCl　　　　　  　　8.0克
KCl　　　　　　　 　0.2克
Tween-20　0.05%　  0.5ml
加蒸馏水至1000ml
(3)　ELISA实验稀释液：
牛血清白蛋白(BSA) 0.1克
加洗涤缓冲液至100ml
或以羊血清、兔血清等血清与洗涤液配成5～10%使用。
(4)　ELISA实验终止液(2M　H2SO4)：
蒸馏水178.3ml，逐滴加入浓硫酸(98%)21.7ml。
(5)　ELISA底物缓冲液(PH5.0磷酸棗柠檬酸):
0.2M Na2HPO4(28.4克/L)              25.7ml
0.1M 柠檬酸(19.2克/L)　　　　　 24.3ml
加蒸馏水50ml。
(6)　ELISA实验TMB(四甲基联苯胺)使用液:
TMB(10mg/5ml无水乙醇)  0.5ml
底物缓冲液(PH5.5)　　　  10ml
0.75%H2O2                          32μl
(7)　ELISA实验ABTS使用液:
ABTS　　　　　　　　0.5mg
底物缓冲液(PH5.5)　    1ml
3%H2O2                          2μl
(8)ELISA实验封闭液：
牛血清白蛋白(BSA) 5克
加洗涤缓冲液至100ml。
提醒：为了保证ELISA实验的准确性，实验操作中加入的缓冲液和各组分一定要精确，将洗涤液加入酶标板中的时候防止加入的试剂混入另外一个酶标孔，严防交叉污染。
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zhaoyt1979
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2013/11/19 19:04:55 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
封闭液中若含有脱脂奶粉，不适合长期保存。
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