主题：【第六届原创】液质检测β兴奋剂之能力认证备战&实战

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sukiliang

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色谱发表于：2013/12/11 19:42:59 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

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楼主本来只负责组织的β兴奋剂，尿液中的β兴奋剂一般很少做，突然接到通知要做能力认证，那个郁闷啊，责任十分重大，关系到未来一年的脸色，领导是四万的嘴型还是八万的嘴型能力认证占了70%。

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接到通知后，只有4天的备战时间，以前做的是气质的方法，液质前处理差不多就是加乙酸乙酯+异丙醇不一样而已，就是忘了内标要加多少。

楼主神经病又犯，开始想硝基呋喃代谢物的内标只需要2ng/ml回收率就做到90%以上，β兴奋剂响应值本来就很好，内标就加个2ppb的吧，应该没问题的。

恐怖的事情出现了，第二天看结果发现，莱克多巴胺的回收率竟然为“0”，晕了，立马再做一次同样加2ppb的内标，晕，当天晚上结果还是跟第一次一样。奇怪了，当年做组织的时候回收率基本100%。完了，莱克多巴胺不怎么好做，如果那个加标的人像上年那样只加莱克多巴胺，俺未来一年将看到比包大人还黑的脸。

= =！艾玛，立马从凌乱的办公桌上把能力认证要求做的标准找出来仔细阅读，无语，标准原来是添加10ppb内标的

第三天，立马加个10ppb内标发现回收率竟然回来了。然后慢慢的回想起，当年做组织加内标的时候一次性加入20ppb，回收率达到100%。按道理如果加20ppb会不会更好一些呢？

备战最后一天，直接加个20ppb。哇，谢天谢地，回收率终于回来了！

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= =！艾玛，山长水远的拿回三个样品，无空白，只有一支1ppm的标准品。想当年报数据的时候只要求报两个，现在要三个数据都报上去，为了保险起见先做一个样品，加标样品做备战时添加浓度，看看结果如何，再定加标的范围。

其余2个样品，楼主拿一空白样品，分成3组，同样整个备战时添加的高中低浓度，然后和能力认证样品一起放入冰箱

开始实验

1.先加入0.5ml的2mmol/ml乙酸铵缓冲液，调ph到9.8

2调完ph以后加入6:4的异丙醇：乙酸乙酯18ml，标准里是需要二次提取，这里还是省了这步骤，之前做过回收率没多大影响，然后再加入140℃烘干过的氯化钠，然后震荡30min。

3、震荡完毕后，取出离心把上清液吸取，尽量吸干净，防止影响回收率，吹到差不多剩下1ml的时候可以活化柱子了，我们那个固相萃取比较奇怪，速度是比较均衡的，但是过柱的速度比之前用开的某种品牌的要慢一点，难道自动控速的？

ps：不知道是不是错觉，6:4的异丙醇：乙酸乙酯特难吹干，反而气质方法4:6的异丙醇：乙酸乙酯很容易就能吹干

4、氮吹50℃吹干，5ml的2mmol/ml乙酸铵缓冲液定容，震荡，准备过柱，过柱步骤按标准，最后收集时候，用6ml的5%氨水甲醇洗脱。

5氮气吹干，1ml初始流动相定容震荡、上机

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当天晚上等结果，自己加标的回收率十分漂亮，能达到偶的要求，第一个样品出来的结果见下表

= =！艾玛，这次算我运气好么？添加浓度如此高，当天晚上看完数据以后立马拿出剩下的样品即刻展开工作

之前加标的低、中浓度可以不要，留下那个高浓度，然后自己在添加个和第一个样品得出的数据开始作业

最终得出以下数据

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所有能力认证的样品已经做完，要开始整理数据。

仔细看看作业指导书。72小时出报告，回收率要求在60%~120%之间。

开始整理数据，如果添加浓度在2.5的话偶报2.4即可通过，此时接到一电话，他们结果是3。

= =！艾玛，这不是打击我嘛，如果添加是3的上限是3.6，下限是1.8，虽然也能通过，但实在危险。最重要就是根本不知道主办方加标是哪天加的，而且β兴奋剂降解不算慢。

如果加4的话报2.4刚刚能过，但是不可能加4如此高吧，超出标准的回收率范围的两倍。不过按照回收率的要求，下线是很宽的，上线比较窄，只能望低的报数。

而且楼主从备战到实战的时候发现一个奇怪问题，如果10ppm内标用甲醇定容到1ppm的话最终定容为1ml，使得内标浓度为20ppb，回收率会好一点（ps：如果用甲醇定容为0.1ppb标线配置的时候内标吸取200ul，那么走出来的色谱图会有拖尾现象），但是实战的时候由于内标剩下0.4ml左右，只能用水相来定容，10ppm的内标吸取100ul定容到10ml容量瓶中，得出0.1ppb。

= =！欢迎大家来讨论一下内标到底用有机溶剂定容好还是用水相定容好？

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经过十分钟的激烈讨论以后，已下决定，选一个平衡好一点的样品一开三狂进20针，选择三个数据上报。

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ps：在此希望这次能力认证顺利通过，结果是“优秀”乃是俺的愿望

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小结：

1.内标浓度不能随便添加，最好要添加与加标浓度相近的数值

2.认真阅读标准

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ps：结果今日已公布，全部合格！

但是心有不甘，本来如果是我一个人说了算的话我会报2.4这个数，但是上司让我往低的报，结果只能混个及格，我的优秀不翼而飞！

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