背景

载脂蛋白Ｅ（apolipoprotein E, ApoE）作为脂质转运蛋白和低密度脂蛋白受体的主要配体，在胆固醇代谢和心血管疾病中发挥重要作用。ApoE有多种异构体，即 ApoE2、 ApoE3 和 ApoE4，分别由APOE的等位基因 ε2，ε3 和ε4来编码；

APOE4等位基因是阿尔茨海默病的主要危险因素，血清ApoE增高与心血管疾病死亡率增加有关，而降低则与AD相关死亡率增加有关；

这些研究发现是基于免疫法，如免疫透射比浊法。但基于免疫法的apoE的研究数据差异较大；而基于液相色谱串联质谱法（LC-MS/MS）的研究数据一致程度较高；

LC-MS/MS在定义被分析物和抗干扰方面具有优势，且在血清载脂蛋白的绝对定量上已有较为成熟的应用。

实验方法

1.样品制备

1.1 APOE混合轻标mix线性1溶液配制：

稀释剂：0.1%SDC作为稀释剂

取浓度为10 ng/μL的APOE1234各轻标肽段溶液10 μL至于离心管中（共40 μL），再加入10 μL稀释剂，混合成为APOE混合轻标mix线性溶液起始浓度最高点：2 ng/μL，共50 μL；

从APOE混合轻标mix线性溶液起始浓度2 ng/μL继续往下梯度稀释，2000 pg/μL、1000 pg/μL、500 pg/μL、200 pg/μL、100 pg/μL、50 pg/μL、20 pg/μL，以上7各浓度点作为APOE混合轻标mix线性1；

1.2 APOE混合重标mix溶液配制：

取浓度为10 ng/μL的APOE1234各重标肽段溶液10 μL至于离心管中（共50 μL），再加入50 μL稀释剂，混合成为APOE混合重标浓度最高点：1 ng/μL，共100 μL；

将APOE混合重标浓度最高点稀释10倍至终浓度为200 pg/μL作为混合重标mix，共500 μL；

1.3 配制APOE混合线性标曲梯度：

稀释剂：0.1%SDC作为稀释剂

取APOE混合轻标mix线性1各浓度点10 μL+混合重标mix10 μL，加入40 μL稀释剂，涡旋混匀，总体积为60 μL；

2 仪器方法

2.1 质谱检测条件

Column:ChromCore AQ C18 1.8 μm，2.1×100 mm

Mobile Phase:A) 0.1%FA-H2O

B) 0.1%FA-ACN

Gradient:t (min)%A%B

0955

19010

108020

10.56040

111090

131090

13.5955

15955

Flow Rate:0.3 mL/min

Temperature:40 ℃

Injection:10 μL

MS:TSQ Altis三重四级杆质谱采用SRM模式进行检测，检测周期15 min；

Sample: APOE（载脂蛋白E）

2.2 APOE标样检测条件

,526,

3 实验结果

3.1 APOE标样检测结果

,552,

3.2 APOE标样检测结果-线性范围及内标重现性

,553,

3.3 实际样品检测结果

,552,

4 讨论与总结

简单地说，本研究使用了APOE1/2/3/4作为定量肽段，绝对定量方法使用合成的同位素标记肽作为内标物，检测样品中目标肽段的浓度；

结果表明，本实验室优化的前处理方法可尽可能实现该类肽段的释放，回收率达到50-60%；

更重要的是，在实际样本的检测中，根据APOE1/2/3/4四条肽段的出现情况，可以得出实际血浆提供者的APOE基因型，此结果已经与基因检测结果进行核对，且成功率达到100%；

公司名称：南京品生医疗科技有限公司

色谱柱信息：ChromCore AQ C18 1.8μm, 2.1×100mm

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