主题：【原创】肝素生物检定法

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发表于：2013/12/24 15:36:08 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

本法系比价肝素标准品（S）与供试品（T）延长新鲜兔血或兔、猪血浆凝血时间的作用，以测定供试品的效价。

标准品溶液的制备：精密称取肝素标准品适量，按标示效价加灭菌注射用水溶解使成每1ml中含100单位的溶液，分装于适宜容器内，4～8℃贮存，经验证保持活性符合要求的条件下，可在3个月内使用。

标准品稀释液的制备试验当日，精密量取标准品溶液，按高、中、低、剂量组（ds3、ds2、ds1）用氯化钠注射液配成三种浓度是稀释液，相邻浓度比值（r）相等；调节剂量使低剂量各管的平均凝血时间相等，用新鲜兔血者，以不超过60分钟为宜，其稀释液一般可制成每1ml中含肝素2～5单位，r为1:0.7左右；用血浆者，以不超过30分钟为宜，其稀释液一般可制成每1ml含肝素0.5～1.4单位，r为1:0.85左右。

供试品溶液与稀释液的制备：按供试品的标示量或估计效价（AT），照标准品溶液与稀释液的制备法制成高、中、低（dT3、dT2、dT1）三种浓度的稀释液。相邻两浓度之比值（r）应与标准品相等，供试品与标准品各剂量组的凝结时间应相近。

血浆的制备：迅速收集兔或猪血置预先放有8%枸橼酸钠溶液的容器中，枸橼酸钠溶液与血液容积之比为1:19，边收集边轻轻振摇，混匀，迅速离心约20分钟（离心力不超过1500×g为宜，g为重力常数）。立即吸出血浆，并分成若干份分装于适宜容器内，低温冻结贮存临用时置37℃±0.5℃水浴融化，用两层纱布或快速滤纸滤过，使用过程4～8℃放置。

测定法（1）新鲜兔血取管径均匀（0.8cm×3.8cm或1.0cm×7.5cm）、清洁干燥的小试管若干支，每管加入一种浓度的标准品或供试品稀释液0.1ml，每种浓度不少于3管，各浓度的试管支数相等。取刚抽出的兔血适量，分别注入小试管内，每管0.9ml，立即混匀，避免产生气泡，并开始计算时间。将小试管置37℃±0.5℃恒温水浴中，从动物采血时起至小试管放入水浴的时间不超过3分钟，注意观察，并记录各管的凝血时间。

（2）、血浆取上述规格的小试管若干支，分别加入血浆一定量，置37℃±0.5℃恒温水浴中预热5～10分钟，依次每管加入一定浓度的标准品或供试品稀释液及17%氯化钙溶液，每种浓度不得少于3管，各浓度的试管支数相等，血浆、肝素稀释液和氯化钙溶液的加入量分别为0.5ml、0.4ml和01.ml，,0.8m、0.1ml和0.1ml，加入氯化钙溶液后，立即混匀，避免产生气泡，并开始计算时间，注意观察并记录各管凝血时间。将各管凝血时间换算成对数，照生物检定统计法（附录ⅩⅣ）中的量反应平行法计算效价及实验误差。

测定法（1）的可信限率（FL%）不得大于10%。

测定法（）的可信限率（FL%）不得大于5%。

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