主题：【第六届原创】液相色谱两大核心条件--流动相与色谱柱

液相色谱两大核心条件--流动相与色谱柱

    色谱柱和流动相（也就是我们常说的固定相）在液相色谱中起着非常关键的作用，是色谱和液相色谱的代表。色谱柱是色谱的代表，起着样品分离的作用，是色谱产品的核心部件，就像人的心脏；流动相是液相色谱的代表，是液相色谱的灵魂，起着运输样品和样品洗脱的作用，就像人体中的血液。

    液相色谱柱和流动相在液相色谱中的作用是不言而喻的，选择合适的流动相和液相色谱柱是高效液相色谱法成败的关键。

    色谱柱和流动相选择合适，对实验结果带来的不仅是效果良好，像缩短检测时间，提高分离度，提高灵敏度，减少实验费用等方面都可能会带来正面影响。

    下面就以检测三聚氰胺和维生素B1为例介绍下。

三聚氰胺检测

色谱条件

检测器：紫外检测器
色谱柱：C18色谱柱，250mm X 4.6mm，5um
离子对试剂缓冲液：准确称取2.10g柠檬酸和2.16g辛烷磺酸钠，加入约980ml水溶解，调节PH值至3.0后，定容至1L，备用
流动相：离子对试剂缓冲液：乙腈=90:10（V:V）
波长：240nm
流速：1.0ml/min
柱温：40℃
进样量：20uL

C18 250mm色谱柱，离子对试剂缓冲液：乙腈=90:10（V:V）色谱图

C18 150mm色谱柱，离子对试剂缓冲液：乙腈=90:10（V:V）色谱图

C8 250mm色谱柱，离子对试剂缓冲液：乙腈=90:10（V:V）色谱图

          C8 150mm色谱柱，离子对试剂缓冲液：乙腈=90:10（V:V）色谱图

检测器：紫外检测器
色谱柱：Pgrandsil-SCX，250mm X 4.6mm，5μm
流动相：0.05mol/L磷酸二氢钾溶液：乙腈=70:30（V:V）
检测波长：240nm
流速：1.5mL/min
柱温：室温
进样量：20uL

250mm色谱柱0.05mol/L磷酸二氢钾溶液：乙腈=70:30（V:V）色谱图

150mm色谱柱0.05mol/L磷酸二氢钾溶液：乙腈=70:30（V:V）色谱图

250mm色谱柱0.05mol/L磷酸二氢钾溶液：乙腈=80:20（V:V）色谱图

150mm色谱柱0.05mol/L磷酸二氢钾溶液：乙腈=80:20（V:V）色谱图

维生素B1检测

色谱条件

检测器：紫外检测器

色谱柱：Pgrandsil STC C18 250mm X 4.6mm，5um

波长：267nm

流动相：在已经装入700ml去离子水的1000ml容量瓶中，加入50mg乙二胺四乙酸二钠，1.1g庚烷磺酸钠，待全部溶解后，加入25ml乙酸5ml三乙胺，用去离子水定容至刻度，摇匀。用乙酸或三乙胺调节该溶液的pH值为3.4，滤膜过滤后，取该溶液860ml与140ml甲醇混合，脫气

流速：1.0ml/min

柱温：室温

进样量：10ul

色谱图：

检测器：紫外检测器

色谱柱：PgrandsilSTC C18 250mm X 4.6mm，5um
流动相：20mM磷酸二氢钠溶液（pH=7.0）：甲醇=80:20（V:V）

波长：267nm
流速：1.0mL/min
柱温：室温

进样量：10ul

色谱图：

概括

1．流动相不同，色谱背景信号值不同，保留时间不同，方法灵敏度也会不一样。

2．色谱柱不同（规格不同）样品出峰时间不同，样品的峰高和峰面积也不同，方法的灵敏度也不一样。

3．在反相色谱中增加有机相的含量，样品保留时间缩短，峰高变高，灵敏度提高，分离度降低。

4．流动相和色谱柱是相互作用的，改变其中一相都有可能会对灵敏度、保留时间、分离度等重要指标起到正向作用。

5．以有机相加缓冲液为流动相比有机相加水为流动相实验效果好（大多指标），包括保留时间、杂质干扰、灵敏度等指标。但这种流动相对色谱柱的破坏程度也相对较大，使用时要综合考虑，选择最佳方案。

6．流动相和色谱柱对实验非常重要，但实验效果并不是完全由这两个条件决定的，有时通过改变其它色谱条件同样能得到理想的结果。

注意：

1．以上实验过程有时间的差异（不是同一时间做的），有环境的差异，有样品的差异等，所以谱图只是参考，不能完全真实的反应实验对比情况。

2．改变色谱条件要立足实验室的当前情况和实验的具体要求，切不可盲目去行事，这样可能会费时、费力，甚至影响实验效果，损坏实验仪器。如果做科研项目，找到最佳的色谱条件那自然是最好的。

总结

1．流动相和色谱柱是液相色谱实验的两大关键条件，尽量做到最佳。

2．实验方案要立足于现状。

3．同时改变多个色谱条件，效果往往会更好。