主题：【分享】漩涡混匀器在细胞质粒提取中的应用

分子生物学（基因工程）的实验中，经常要做细胞质粒DNA的提取和检测工作，以便获得运载基因的载体DNA；或用于实行电泳检测分析，了解样品是否含有质粒DNA（包括重组质粒DNA），判断其分子量大小，区别不同质粒等等。因此质粒DNA的提取是基因工程实验中最常用的手段之一。

质粒是一种染色体外的稳定遗传银子，大小从1kb到200kb不等，大多数来自细菌的质粒是双链、共价闭合环状的分子，并以超螺旋形式存在于宿主的细胞质中。它是细菌内的共生型遗传因子，主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中，质粒具有自主复制和转录能力，能在子代细胞中保持恒定的拷贝数，并表达所携带的遗传信息。

质粒的分离是利用质粒DNA和染色体DNA在变性与复性中的差异来达到的目的。当菌体在NaOH和SDS溶液中裂解时，蛋白质与DNA发生变性，由于染色体DNA与质粒DNA拓扑构型不同，染色体DNA双螺旋结构解开，而共价闭合质粒DNA的氢键虽被断裂，但两条互补链彼此相互盘绕仍会紧密地结合在仪器。当加入中和液后，溶液pH恢复至中性，在高盐浓度的情况下，染色体DNA之间交联形成不溶性网状结构并与蛋白质SDS复合物等形成沉淀；不同的是质粒DNA复性迅速而准确，保持可溶状态而留在上清中。这样，通过离心可沉淀大部分细胞碎片、染色体DNA、RNA及蛋白质。除去沉淀后上清中的质粒可用酚氯仿抽提进一步纯化质粒DNA。

前面提取质粒DNA的方法就是实验室常用的碱裂解法，该法的操作过程如下：首先讲含有质粒的细菌接种到培养基，经过大约12小时的恒温摇陪后弃去上清液，加入中和液后用漩涡混匀器将溶液充分混匀，然后加入碱液进行沉淀，这就是变性与复性，最后的操作就是实验室常用的沉淀的分离、纯化。分离、纯化DNA首先取上清液，加入分离液后采用漩涡混匀器混匀溶液，离心取上清液，加入无水乙醇后混匀，离心后弃上清液，干燥DNA即可。

这个实验中常用到漩涡混匀器进行溶液混匀，意大利VELP公司推出多种型号的漩涡混匀器可满足每一个实验室的需要和安全标准。特别是红外漩涡混匀器，这是VELP公司的专利，该漩涡混匀器一旦检测到试管即自动开始震动混匀，不需要施加任何外力，震动速度可调，时间可设，漩涡混匀器稳定性高，非常适合细胞质粒提取实验。