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主题：【原创】流动相中的缓冲盐

浏览0 回复83 电梯直达
御风飘逝
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发表于：2014/01/28 10:31:35 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
最近做实验，也用到了缓冲盐。

带有缓冲盐的流动相，感觉好麻烦的说。

还是调整pH，还是和有机溶剂相进行混合。

可是得到的流动相，pH上会有一定的差异，与有机溶剂相混合时候的组成比例会有一定的差异。最后得到的流动相也会有一定的差异了。

具体表现出来，就是每次配制的流动相，得到样品的各物质的保留时间不一致。

不光如此，色谱柱的平衡也算一个问题，需要更多的时间来平衡。

我现在做的等度洗脱还好一些，一般半小时或一小时就可以搞定了。

有位师兄用的是梯度洗脱，每次都要小流速过夜来平衡色谱柱，才能保证平衡的比较好。

而如果不过夜的话，三四个小时也不能保证能正常进样。

既然这样的不堪，为什么流动相中必须要有缓冲盐呢？

对于缓冲盐的作用，一般是这样的一些看法：主要是抑制样品的解离、具有一定的pH缓冲能力，可以很好的改善峰型。

选择什么pH的缓冲盐，要根据目标物的PKa值来决定。

选择合适的缓冲盐，对于样品检测，以及色谱柱的寿命都有非常积极的意义。

如果缓冲盐选择不当或者使用不当，可能会造成色谱柱柱压升高、柱效下降以及使化合物的保留时间发生变化等影响。

一般是缓冲盐使用不当导致缓冲盐析出，堵塞塞板和键合相颗粒之间的孔隙，阻碍流动相传质，引起柱压升高。

而如果没有冲洗干净就进行进样，色谱柱内含有的盐会使化合物的保留时间发生变化。

另外，有些缓冲盐会渗入到键合相的深处，损害硅胶基体，导致色谱柱键合相流失，柱床变松，从而导致柱效下降；或者凝结在键合相表面，使C18碳链难以舒展，对物质的保留能力下降，也能导致柱效下降。

因此，使用过缓冲盐后需要对色谱柱进行冲洗，水中缓冲盐浓度较大时应特别引起注意。
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御风飘逝
yuanrui82
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2014/1/28 11:26:51 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
你们用缓冲盐的时候遇到情况了吗？
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2014/1/28 19:45:58 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
用缓冲盐确实会麻烦多点。
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御风飘逝
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2014/1/29 10:37:07 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 wsy18(wsy18) 发表:
用缓冲盐确实会麻烦多点。
所以要特别用心才行。
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2014/1/29 12:43:55 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 御风飘逝(yuanrui82) 发表:
原文由 wsy18(wsy18) 发表:

用缓冲盐确实会麻烦多点。
所以要特别用心才行。


一般老手问题不大，就怕新手不认真。
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三人行
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2014/1/31 23:46:03 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
缓冲盐的浓度尽可能低些。
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三人行
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2014/1/31 23:47:49 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 御风飘逝(yuanrui82) 发表:
你们用缓冲盐的时候遇到情况了吗？


以前做过一样品，流动相的缓冲盐不断析出，经常堵塞单向阀。
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三人行
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2014/2/6 22:20:49 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
磷酸盐浓度过大易析出。
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wsy18
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2014/2/9 17:55:46 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 三人行(jncxyy2012) 发表:

磷酸盐浓度过大易析出。


盐类的渗透能力很强。
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三人行
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2014/2/9 20:44:39 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 wsy18(wsy18) 发表:
原文由 三人行(jncxyy2012) 发表:

磷酸盐浓度过大易析出。


盐类的渗透能力很强。


易污染色谱柱柱头。
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2014/2/9 22:29:51 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 三人行(jncxyy2012) 发表:
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原文由 三人行(jncxyy2012) 发表:

磷酸盐浓度过大易析出。


盐类的渗透能力很强。


易污染色谱柱柱头。


是的，所以用过后要冲洗时间长些。
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