主题：【求助】求助：MDQ毛细管电泳电流前十分钟电流不稳定。但是十分钟后就平缓了。是怎么回事儿？

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原文由 瀛台寂(v2772193) 发表:

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原文由 CEcret(v2812644) 发表:
1.柱活化不用HCl,因为对处理硅羟基没帮助。只用NaOH,然后水，然后buffer.
2.buffer冲洗时间要足够长，如果你的毛细管在水冲洗以后用buffer冲洗不够，就会出现电流上升的情况。

赞同第二条。进样品之前，一定要用buffer长时间冲洗，尤其是PBS，绝对不能冲洗20分钟就完事。

二十分钟？我从来都没有冲洗过那么长时间啊。我一般就是缓冲5~7分钟就完事儿了。

最经做实验分离葡萄糖和果糖时，会出来三条吸收峰。然后我就单独分离了下葡萄糖和果糖。果糖是正常的，但是葡萄糖会出来两条峰。

最近很愁这个情况。

有人说可能是在衍生的时候出现了葡萄糖的同分异构体。也说缓冲液的ph值可能会有影响。这个缓冲时间会有影响吗。

个人觉得出现葡萄糖的同分异构体的可能性比较大。但是不知道怎么去验证这个结果啊。

是标准品做的吗？其实只要分得好，随便选一个来做定量，另外一个就以副产物处理就好了。如果想考察它的结构就打一下质谱，有CE-MS最好，没有的话就LC-MS。

原文由 ericwong(ericwong) 发表:

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1.柱活化不用HCl,因为对处理硅羟基没帮助。只用NaOH,然后水，然后buffer.
2.buffer冲洗时间要足够长，如果你的毛细管在水冲洗以后用buffer冲洗不够，就会出现电流上升的情况。

赞同第二条。进样品之前，一定要用buffer长时间冲洗，尤其是PBS，绝对不能冲洗20分钟就完事。

二十分钟？我从来都没有冲洗过那么长时间啊。我一般就是缓冲5~7分钟就完事儿了。

最经做实验分离葡萄糖和果糖时，会出来三条吸收峰。然后我就单独分离了下葡萄糖和果糖。果糖是正常的，但是葡萄糖会出来两条峰。

最近很愁这个情况。

有人说可能是在衍生的时候出现了葡萄糖的同分异构体。也说缓冲液的ph值可能会有影响。这个缓冲时间会有影响吗。

个人觉得出现葡萄糖的同分异构体的可能性比较大。但是不知道怎么去验证这个结果啊。

对毛细管进行活化的时候，如果缓冲液没有进行长时间的平衡，会出很多的问题。

活化的时候只用缓冲液冲洗20分钟，我都是觉得时间太短。

原文由 瀛台寂(v2772193) 发表:

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1.柱活化不用HCl,因为对处理硅羟基没帮助。只用NaOH,然后水，然后buffer.
2.buffer冲洗时间要足够长，如果你的毛细管在水冲洗以后用buffer冲洗不够，就会出现电流上升的情况。

赞同第二条。进样品之前，一定要用buffer长时间冲洗，尤其是PBS，绝对不能冲洗20分钟就完事。

二十分钟？我从来都没有冲洗过那么长时间啊。我一般就是缓冲5~7分钟就完事儿了。

最经做实验分离葡萄糖和果糖时，会出来三条吸收峰。然后我就单独分离了下葡萄糖和果糖。果糖是正常的，但是葡萄糖会出来两条峰。

最近很愁这个情况。

有人说可能是在衍生的时候出现了葡萄糖的同分异构体。也说缓冲液的ph值可能会有影响。这个缓冲时间会有影响吗。

个人觉得出现葡萄糖的同分异构体的可能性比较大。但是不知道怎么去验证这个结果啊。

是标准品做的吗？其实只要分得好，随便选一个来做定量，另外一个就以副产物处理就好了。如果想考察它的结构就打一下质谱，有CE-MS最好，没有的话就LC-MS。

还可以这样子做啊？是做的标准品。可是这样出现两条吸收峰。怎么做定性啊？没办法确定那条峰才是我想要的啊。

原文由 瀛台寂(v2772193) 发表:

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1.柱活化不用HCl,因为对处理硅羟基没帮助。只用NaOH,然后水，然后buffer.
2.buffer冲洗时间要足够长，如果你的毛细管在水冲洗以后用buffer冲洗不够，就会出现电流上升的情况。

赞同第二条。进样品之前，一定要用buffer长时间冲洗，尤其是PBS，绝对不能冲洗20分钟就完事。

二十分钟？我从来都没有冲洗过那么长时间啊。我一般就是缓冲5~7分钟就完事儿了。

最经做实验分离葡萄糖和果糖时，会出来三条吸收峰。然后我就单独分离了下葡萄糖和果糖。果糖是正常的，但是葡萄糖会出来两条峰。

最近很愁这个情况。

有人说可能是在衍生的时候出现了葡萄糖的同分异构体。也说缓冲液的ph值可能会有影响。这个缓冲时间会有影响吗。

个人觉得出现葡萄糖的同分异构体的可能性比较大。但是不知道怎么去验证这个结果啊。

对毛细管进行活化的时候，如果缓冲液没有进行长时间的平衡，会出很多的问题。

活化的时候只用缓冲液冲洗20分钟，我都是觉得时间太短。

really？我年前做都没有冲洗很长时间啊。但是自我感觉结果还不错啊。这个和管子是不是也有关系的。我用的是贝克曼送的管子。貌似很不错。

原文由 瀛台寂(v2772193) 发表:
同志们。正解来了。
我给贝克曼的技术经理发了封邮件。她说有可能是进样量太大了。进样量如果超过了毛细管的百分之一可能会出现这种情况。
然后我就把进样量减低了些。这个情况就消失了。
可能我在开始的时候没有把我的实验条件说的太明白。我使用是非涂层的毛细管。做的实验室利用α-萘胺衍生法分离葡萄糖和果糖。用的缓冲液是ph=9.7的75mmol/l的硼砂缓冲液（没有脱气，但是以前做的时候都是正常的）。分离条件是8kv，正常电流会达到65~70mA。进样条件是5.0psi，8s。
谢谢大家了。