主题：【分享】常见的菌种保藏方法

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aaaa2012

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发表于：2014/03/21 09:57:08 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

定期移植法（也称传代培养保藏法）

将菌种接种于适宜的培养基中，待生长充分后，于4℃-6℃进行保存并间隔一定时间进行移植培养的菌种保藏方法。包括斜面培养、穿刺培养、液体培养等。

液体石蜡法（也称矿物油保藏法）

是定期移植保藏法的辅助方法。将菌种接种到适宜的斜面培养基上，在最适条件下培养至菌种长出健壮菌落后注入灭菌的液体石蜡，使其覆盖整个斜面，再直立放置于4℃-6℃保存的一种保藏方法。

瓷珠保藏法

将培养好的微生物细胞或孢子制成悬浮液，转入装有无菌多孔玻璃珠（或瓷珠）的无菌瓶中，使其吸附于玻璃珠表面，去除多余的悬浮液，低温冷冻保存的一种菌种保藏方法。

-80℃低温保藏

将菌种保藏在-80℃冰箱的一种保藏方法。原理是低温条件可减缓微生物的新陈代谢，以达到长期有效的保藏微生物。

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2014/3/21 9:57:37 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

常见菌种保藏方法操作：
液体石蜡法（也称矿物油保藏法）
将欲保存菌种接种到最适宜的培养基上；
选择纯净优质石蜡油，经121℃，30分钟灭菌，灭菌后将其放烘箱中(160℃左右)干热处理，除灭菌时渗入的水分；
待石蜡油变得清澈透明后，冷却即可加入斜面，斜面上不能出现气泡，液蜡添加量以高出斜面顶部约1cm左右为宜；
密封后保藏，保藏温度要求在4～6℃。
瓷珠保藏法
将直接2mm-3mm的瓷珠分装到小螺帽管中制成冷冻管，高压灭菌；
标记冷冻管，并在无菌条件下打开冷冻管；
将待保存菌株的新鲜培养物接入培养基中，制成菌悬液后，将菌悬液接入冷冻管中；
拧紧管帽，来回颠倒四到五次。勿使用涡旋振荡器；
待菌株吸附到瓷珠上后，将多余菌悬液吸出。
-80℃低温保藏
将培养好的菌种制成高浓度菌悬液(108～1010CFU/mL)；
取灭菌甘油与菌悬液充分混匀，使甘油浓度约为20%；
混匀后分装入冷冻试管或安瓿中，于-80 ℃超低温冰箱中保藏。
菌种保藏注意事项：
适宜的培养基（定期移植法与液体石蜡法）：
细菌--营养琼脂；
真菌--PDA；
乳酸菌--MRS培养基；
厌氧菌--庖肉培养基；
嗜盐性弧菌--含3%NaCl的TSA或营养琼脂；
适宜的温度：
根据菌株特性在适宜的温度下保藏。如：副溶血弧菌、创伤弧菌、霍乱弧菌等致病弧菌，室温(25℃以下)保存，不能冷藏。
适宜的氧气条件：
根据菌株特性，提供适宜的氧气条件，如微需氧条件或厌氧条件。

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