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液相色谱（LC）
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主题：哪位有液相测定氨基酸含量的方法？麻烦共享一下

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liu802
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发表于：2006/08/21 10:39:00 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
国标上用氨基酸测定仪来测定氨基酸含量，但我们没有这个仪器，现在想用液相色谱仪来测，好像要用柱前衍生化方法来测，苦于没有相关含测的资料，哪们同仁有的话请在这里共享．谢了．
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2006/8/22 5:46:00 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
你有什么仪器？做多少种氨基酸？
我手上有OPA方法，也有AccQTag方法。
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wolfyin
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2006/8/23 11:02:00 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我手上有异硫酸氰酸苯酯法,有兴趣的话,与我联系022-85687055
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caofm
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2006/8/24 14:06:00 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
如果只是偶尔做氨基酸，不如把样品交给对外收费做样的单位；
如果经常做氨基酸，请参照以下比较（摘自“氨基酸分析方法和仪器浅述”一文，此文章可在资料中心0分下载）

总体的成本应考虑到做样成本，而不能只看仪器本身。HPLC做氨基酸分析时，每根柱子只能进样100－500针，而IEC仪器的柱子都超过1000针（sykam柱子使用国产试剂时大于2000针，使用进口试剂时大于4000针）。
如果都使用国产试剂，HPLC仪器单针成本平均160元人民币，IEC仪器单针成本平均20元人民币，IC仪器单针成本平均60元人民币（IC法无需衍生剂，但检测电极是消耗品）。此处计算了标样、缓冲溶液、衍生剂、柱子等消耗品价格，而仪器的维护保养费用相同（未计算）。下表是专用氨基酸分析仪IEC、HPLC和IC（都配置自动进样，HPLC加配氨基酸分析包）的总成本分析。
三种分析方法的总费用比较

总费用                 IEC         HPLC（平均值）     IC
          初次花费    60万－70万    25万－35万    50万－60万
1500针（约600个样）    63万－73万    49万－59万    59万－69万
2500针（约1000个样）    65万－75万    65万－75万    65万－75万
5000针（约2000个样）    70万－80万    105万－115万    80万－90万
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palmT5
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2006/8/24 16:20:00 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
人家说方法，楼上几位怎么卖起东西了。
楼主还是我给你个方法吧，包括流动相梯度比例，图什么的。


HPLC方法
色谱柱: ProntoSIL 120-3-C18 H, 200 x 3.0 mm ID
固定相: ProntoSIL 120-3-C18 H
样品预处理: SIGMA standard AA-S-18; OPA柱前衍生
检测器: 荧光检测器(Ex 330 nm, Em 450 nm), 紫外检测器(330 nm)
条件:
流动相: A) 20 mM 醋酸钠水溶液/乙腈(97:3, v/v) B) 20 mM 醋酸钠水溶液/乙腈(50:50, v/v)
梯度: 在0-144 s 5 – 28 % B
145 – 560 s 28 – 45 % B
561 – 896 s 45 – 82 % B
897 – 1215 s 82 – 90 % B
流速: 0.6 ml/min
温度: 30°C
进样量: 1 µl



色谱图

1. 天冬氨酸 9. 酪氨酸
2. 谷氨酸 10. 缬氨酸
3. 丝氨酸 11. 半胱氨酸
4. 甘氨酸 12. 蛋氨酸
5. 苏氨酸 13. 异亮氨酸
6. 组氨酸 14. 苯丙氨酸
7. 丙氨酸 15. 亮氨酸
8. 精氨酸 16. 赖氨酸


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yezhiyan
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2006/8/25 9:12:00 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
用HPLC做氨基酸方法与普通的HPLC最大差别是样品需要进行柱前衍生,然后才能进行进样
柱前衍生我有一个方法
1.
干燥液:  甲醇:水:三乙胺=2:2:1
衍生液:异留氰酸苯脂:甲醇:水:三乙胺=1:7:1:1
稀释液:710mg磷酸氢二钠加超纯水到1升,用10%的磷酸:乙睛(95:5)调节pH为7.4
2.
(1)10微升水解液到小试管,真空(氮气吹干)抽干
(2)加等量干燥液吹干
(3)加20微升衍生液,混匀,室温25分钟,吹干

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caofm
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2006/8/25 9:20:00 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
先赔个不是！

我这里也有方法，但确实是效果不好。下附。


Dansyl-Cl法蛋白水解液色谱图

分析柱: Spherisorb ODSⅡ,3μm
            4.6×125mm  加预柱
柱  温: 25℃
流动相: A:  3%四氢呋喃于15mM磷酸盐缓冲液中, pH6.3 B: 60%乙腈           
检测: 荧光, 激发330nm, 发射350nm


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2006/8/25 11:10:00 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
从大家提供的方法来看，氨基酸测定确实比较复杂，而我们条件也不成熟，ＨＰＬＣ有大连依利特的，也有一台岛津的，但都是只有紫外检测器，像蒸发光、荧光、发射光等检测器都没有，想问一下还有没有其他简单一点的方法？
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liu802
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2006/8/25 11:15:00 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
费用要那么高吗？还真是吓了一跳，一根柱子只能进１００－５００针，是不是进这么多针柱子就会报废了？其实我们也不需要常做，只是自己可以检测的话，可以更好的控制自己产品的质量．
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2006/8/25 13:28:00 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
8楼的朋友： 100－500针的假定条件是“国产溶液”，如果全部使用进口缓冲液，HPLC柱子用到1000针以上也是可能的，只不过费用并没有太大的不同（平均下来的单针成本基本不变）。另外，也不是说做这么多样品后就报废了，一来如果有条件可以重填，二来对结果要求不是很苛刻时也还可以继续用一段时间。 其实柱前衍生能做到500针以上的的确很少，因为衍生物一般比较稳定，对柱子损坏较大。个别方法技术上有突破，但专利衍生试剂独家销售，费用更高。

  如果氨基酸样品较少，sykam有一款半自动型号S433（可到资料中心下载样本，搜索“氨基酸分析仪”即可），唯一的不同是进样是手动的（Rheodyne高压阀、定量环）。
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colleen
yjpgreen
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2006/8/25 17:45:00 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
文献中氨基酸的测定方法
氨基酸测定方法pdf


安捷伦测氨基酸的方法:Agilent ZORBAX Eclipse AAA使用说明书.pdf
Agilent ZORBAX Eclipse AAA使用说明书pdf
附件：
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氨基酸测定方法pdf
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