主题：【原创】保卫舌尖上的安全专题之三──畜产品兽药残留快速检测之试剂盒质量评估

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发表于：2014/04/15 14:37:16 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

保卫舌尖上的安全专题之三──畜产品兽药残留快速检测之试剂盒质量评估

　　目前兽药残留酶联免疫试剂盒品种和生产厂家很多，质量良莠不齐，如何评估试剂盒质量成为基层实验室，尤其是基层检测人员亟待解决的难题之一。现结合农业部有关技术规范，以及本人多年来的工作实践，谈一点粗浅的体会。如有不当之处，请各位同仁批评指正。
　　农业部《兽药残留试验技术规范（试行）》（农牧发［2003］1号）规定：
　　兽药残留检测方法的精密度（变异系数）、回收率和最低检测限的要求如下；
　　1．精密度
　　精密度以变异系数（CV％）表示，所采用的检测方法应符合残留检测方法精密度的要求，根据待测物浓度不同，其精密度要求如下：

待测物浓度μg/kg 批内变异系数(CV%) 批间变异系数(CV%)
100000 1.5 2.3
10000 7 11
1000 11 16
100 17 26
10 21 32
1 30 45
0.1 43 64
　　
　　2．回收率
　　用添加法测定回收率，至少选定3个添加浓度，一般最低检测限（或2倍）为必选的浓度。每一浓度5个样，进行不少于4次重复试验。
　　不同添加浓度的回收率原则要求如下：
　　添加浓度m（μg/kg）回收率（％）
p≥100 80～110
100＞p≥10 70～110
10＞p≥1 60～120
p≤1 50～120
　　3．灵敏度
　　灵敏度以最低检测限（mg/kg或μg/kg）表示。检测方法的灵敏度必须低于或等于相应的最高残留限量，其相关数值如下：

最高残留限量μg/kg 1 10 20 50 100 200
灵敏度μg/kg 1 5 10 20 20 40

最高残留限量μg/kg 500 1000 2000 5000 10000
灵敏度μg/kg 100 100 200 200 500

注：如最高限量≤50μg/kg时，则灵敏度可低于或等于最高残留限量。

　　另外，在评估试剂盒质量时，还需考虑以下因素：
　　4.IC50平均值：英文half maximal (50%) inhibitory concentration (IC) of a substance (50% IC, or IC50)，我国一般称为半抑制浓度（或半抑制率），缩写IC50。在竞争ELISA标准曲线中这是一个非常重要的数据。在竞争ELISA中，不添加抑制物的对照孔的OD值为B0，添加了抑制物的OD值为B，B/B0%就是结合率，在结合率为50%时所对应的抑制物的浓度就是IC50。一般IC50的数值越小，说明抗体的特异性能越强！
　　5.特异性：与类似物质的反应程度越小越好。
　　6.实际检测效果：评估上述指标一般均采用标准品或基质较纯净的样品，效果自然较好。在实际检测过程中，样品的基质差异很大，有的偏酸，有的偏碱，有的带有细胞、脓液，有的含有其它兽药代谢产物。因此在评估一个兽药残留酶联免疫试剂盒时，还应该用已经其它仪器方法（如GC-MS、LC-MS）确认阳性的样品，进行反复检测，评估试剂盒对实际样品的检测能力。

　　以克伦特罗为例，目前农业部规定酶联免疫法检出限为1μg/kg，所以考核酶联免疫试剂盒的指标应该是：

满足要求性能优秀
1.批内变异系数 ≤30% ≤10%
2.批间变异系数 ≤45% ≤15%
3.回收率： 60%~120% 80%~110%
4.灵敏度： ≤1μg/kg ≤0.5μg/kg
5.IC50 (0.5~1)μg/kg ≤0.5μg/kg

　　在基层实验室，一般可只做批内变异系数、回收率、灵敏度和IC50，批间变异系数和特异性可核对说明书相关内容。

　　下面给出一个实验室内部评估时的样品排列图，供参考：

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
A B0 B4 S12 S14 S21 S23 S25 S32 S34
B B0 B4 S12 S14 S21 S23 S25 S32 S34
C B1 B5 S12 S14 S21 S23 S25 S32 S34
D B1 B5 S12 S14 S21 S23 S25 S32 S34
E B2 S11 S13 S15 S22 S24 S31 S33 S35
F B2 S11 S13 S15 S22 S24 S31 S33 S35
G B3 S11 S13 S15 S22 S24 S31 S33 S35
H B3 S11 S13 S15 S22 S24 S31 S33 S35

S11代表第一个添加浓度的第1份样品，S12代表第一个添加浓度的第2份样品，依此类推。
添加浓度：按农业部规定至少选定3个添加浓度，而克伦特罗的检出限为1μg/kg，所以添加浓度1μg/kg为必选，其余2个添加浓度可选择0.5μg/kg和2μg/kg。

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