主题：【求助】求大肠菌群MPN法的详细步骤

请按附件GB/T 5750.12-2006 《生活饮用水标准检验方法 微生物指标》中的2.1多管发酵法操作即可。

查一下国标嘛，国标中有详细介绍

1.MPN法注意事项：
•全过程不得超过15min。
•样品匀液的pH值应在6.5～7.5之间，
•（如接种量需要超过1mL，则用双料LST肉汤）
•以48h±2h为最终观察结果时限。结果也以此时为最终结果

2.MPN法培养基：LST、BGLB

（1）月桂基磺酸盐胰蛋白胨（LST）

月桂基磺酸钠能抑制革兰氏阳性菌的生长，同时比胆盐的选择性和稳定性好。由于胆盐与酸产生沉淀，沉淀有时候会使对产气情况的观察变得有些困难；
•乳糖是大肠菌群可利用发酵的糖类。有利于大肠菌群的生长繁殖并有助于鉴别大肠菌群和肠道致病菌；
•胰蛋白胨提供基本的营养成分；
•LST肉汤是国际上通用的培养基，与乳糖胆盐肉汤的作用和意义相同，但具有更多的优越性。
•发酵试验判定原则：产气为阳性。
检测步骤减少（不必分离培养），检测时间缩短24h。
•注：如接种量超过1mL，则应用双料LST肉汤

（2）煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）

胆盐可抑制革兰氏阳性菌。
•煌绿是抑菌抗腐剂，可增强对革兰氏阳性菌的抑制作用。
•乳糖是大肠菌群可利用发酵的糖类。有利于大肠菌群的生长繁殖并有助于鉴别大肠菌群和肠道致病菌。
•发酵试验判定原则：产气为阳性。由于配方里有胆盐，胆盐遇到大肠菌群分解
•乳糖所产生的酸形成胆酸沉淀，培养基可由原来的绿色变为黄色，同时可看到管底通常有沉淀。
MPN检索表的应用

•MPN（最可能数most probable number）是表示样品中活菌密度的估测。因此MPN值只是活菌密度的估算值，并不是样品中活菌数的真值。

4.使用MPN检索表的注意点

•这个MPN检索表是ISO、FDA、AOAC、USDA/FSIS、北欧等标准通用的。
•表里的数字是有小数点的。
•报告单位不同。现报告单位为g/ml，而原报告单位是100g/ml。
•原标准MPN表有64个组合，而现标准MPN表只有40个组合。

当实验结果在MPN表中无法查找到MPN值时，如：阳性管数为122，123，232，233等时，建议增加稀释度(可做4~5个稀释度)，使样品的最高稀释度能达到获得阴性终点(如果污染程度不能判定，则多加一稀释度)，然后再遵循相关的规则进行查找，最终确定MPN值。
具体的操作步骤按GB4789.3-2010

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GB/T5750.12-2006生活饮用水的操作程序