原文由 bingwang228(bingwang228) 发表:原文由 snooker(snooker) 发表:你的梯度开始时100%的B但是你再执行该程序的之前流动相走的是什么?还有仪器有自动归零功能,也有可能是自动归零的影响原文由 bingwang228(bingwang228) 发表:
可能是溶剂切换的原因,是不是执行平衡色谱柱程序前后的流动相不一样或者比例不一样
平衡色谱柱有一个梯度方法,就是从纯甲醇过渡到我要用的条件下,如下图
原文由 snooker(snooker) 发表:原文由 e_liang369(v2821515) 发表:
1min变化50%,太快了,即使你完全平衡,基线也可能很糟糕,从来没见过这种梯度,用到3个流动相来洗脱,前面基线有问题可能就是因为流动相变化太快
好吧,流动相里 A:水 B:甲醇 D:缓冲盐。每次平衡结束后基线也挺好的。我的问题是吸光度为什么一直是 - 4.0 呢?
原文由 snooker(snooker) 发表:从你的梯度程序可以看出,你在开始的1min内是有流动相比例变化的,即流动相从开始的100%甲醇变为50%的水和50%甲醇,从而吸光度产生了改变。从吸光度图上也可以看出,其变化也发生在1min内,并且从第一张图中也可以看到,第一张图中在22min出现吸光度的峰,如果两者的梯度程序一样,也说明了这是在22min左右出现流动相变化的原因。原文由 bingwang228(bingwang228) 发表:原文由 snooker(snooker) 发表:你的梯度开始时100%的B但是你再执行该程序的之前流动相走的是什么?还有仪器有自动归零功能,也有可能是自动归零的影响原文由 bingwang228(bingwang228) 发表:
可能是溶剂切换的原因,是不是执行平衡色谱柱程序前后的流动相不一样或者比例不一样
平衡色谱柱有一个梯度方法,就是从纯甲醇过渡到我要用的条件下,如下图
一般开机平衡,我都是从零开始的,系统保存在纯甲醇中,流速是0。在这之前没有别的流动相在走的
原文由 e_liang369(v2821515) 发表:原文由 snooker(snooker) 发表:原文由 e_liang369(v2821515) 发表:
1min变化50%,太快了,即使你完全平衡,基线也可能很糟糕,从来没见过这种梯度,用到3个流动相来洗脱,前面基线有问题可能就是因为流动相变化太快
好吧,流动相里 A:水 B:甲醇 D:缓冲盐。每次平衡结束后基线也挺好的。我的问题是吸光度为什么一直是 - 4.0 呢?
你是新手吧?从你平衡设置的梯度跟表述能看出个一二来。从你前面的色谱图来看0min时压力为0psi,也就是说你进样前莫非停了流速后在去运行你的方法,不然咋么也不可能压力0-2min从0变到2000多psi,你先把急剧变化的压力这段跟我讲清楚我才好跟你分析,把你的洗脱梯度也一并提上来。