主题：【求助】液相色谱柱平衡时吸光度问题

原文由 e_liang369(v2821515) 发表:

另外你在平衡色谱柱的时候，在设置“功能”-“平衡色谱柱的时候”好像就有误，你先去把“功能”里的“平衡色谱柱”这个参数搞明白，你这里设置就是错误的。就你这个设置我就弄清楚了为啥进样时0min的压力是0psi！！！要实在搞不明白你在来问！

原文由 e_liang369(v2821515) 发表:

1min变化50%，太快了，即使你完全平衡，基线也可能很糟糕，从来没见过这种梯度，用到3个流动相来洗脱，前面基线有问题可能就是因为流动相变化太快

原文由 小虾米(wuxia330) 发表:

原文由 e_liang369(v2821515) 发表:

1min变化50%，太快了，即使你完全平衡，基线也可能很糟糕，从来没见过这种梯度，用到3个流动相来洗脱，前面基线有问题可能就是因为流动相变化太快

的确是很哪见到，而且重复性应该不好！

原文由 bingwang228(bingwang228) 发表:
做了简单的实验，希望能解决楼主的问题。图1和2是在仪器未平衡时执行平衡色谱柱呈现的基线图，执行平衡色谱柱前后流动相有变化，执行前流动相为乙腈：水=10：90；执行后流动相变化为乙腈：缓冲盐=30：70，此时检测器还没有完全预热，色谱柱由于流动相改变，也未达到平衡，因此在图1中出现了流动相改变形成的尖峰，图2的响应值变化比较大，和楼主的情况相似。另外，图1和图2采取的是两者不同检测方法，图1为3D扫描模式，图2为固定波长216，可见扫描波长不同也会影响基线。图3和4是仪器和色谱柱平衡一段时间后再执行平衡色谱柱呈现的基线图，两次的色谱条件一致，但此时未出现图1和图2的情况。初步说明产生楼主图1和图2情形的原因为1、仪器和色谱柱未平衡；2扫描波长对基线色谱图的影响

图1图2图3图4

原文由 snooker(snooker) 发表:

原文由 bingwang228(bingwang228) 发表:
做了简单的实验，希望能解决楼主的问题。图1和2是在仪器未平衡时执行平衡色谱柱呈现的基线图，执行平衡色谱柱前后流动相有变化，执行前流动相为乙腈：水=10：90；执行后流动相变化为乙腈：缓冲盐=30：70，此时检测器还没有完全预热，色谱柱由于流动相改变，也未达到平衡，因此在图1中出现了流动相改变形成的尖峰，图2的响应值变化比较大，和楼主的情况相似。另外，图1和图2采取的是两者不同检测方法，图1为3D扫描模式，图2为固定波长216，可见扫描波长不同也会影响基线。图3和4是仪器和色谱柱平衡一段时间后再执行平衡色谱柱呈现的基线图，两次的色谱条件一致，但此时未出现图1和图2的情况。初步说明产生楼主图1和图2情形的原因为1、仪器和色谱柱未平衡；2扫描波长对基线色谱图的影响

图1图2图3图4

灰常感谢大侠的实验讲解，问题已有初步眉目。

原因主要是灯没有预热完全，在之前的谱图中，都是平衡色谱柱方法运行同时开氘灯。受您启发这两次我，在平衡色谱柱前将灯提前启动预热。运行后谱图如下。（按照之前板油的建议，将流速递变时间延长了一些，系统压力升的慢了一些）

原文由snooker(snooker)发表:

原文由 小虾米(wuxia330) 发表:

原文由 e_liang369(v2821515) 发表:

1min变化50%，太快了，即使你完全平衡，基线也可能很糟糕，从来没见过这种梯度，用到3个流动相来洗脱，前面基线有问题可能就是因为流动相变化太快

的确是很哪见到，而且重复性应该不好！

我这个就像大家测试结束后编个程序冲洗柱子一样，只不过，是将冲洗完的柱子在过渡到我要测试的环境下，这个不是用来测试用的。例如下面在序列前后添加一个平衡柱子的程序，和测试没有关系的。在这期间的样品进样重复性很好。