主题：【第七届原创】柑橘和土壤中四螨嗪残留量的液相色谱测定法

四螨嗪( 3，6-双( 邻氯甲苯) -1，2，4，5-四嗪) 是一新型高效杀螨剂，对叶螨的卵和幼、若螨触杀效果好，不能触杀成螨，但成螨触药后产卵量减少，卵的孵化也受到抑制。该药持效期长，防治效果好。［1］目前，我国公布的四螨嗪在柑橘中最大残留限量标准( MＲL 值)为0. 5 mg /kg，在国外，对四螨嗪的检测方法已有报道［2］，在国内，对于该农药在水果中的检测方法极少有报道。我们以柑橘和土壤为样品，采用固相萃取－液相色谱法测定土壤中柑橘四螨嗪残留量。
1 材料与方法
1. 1 仪器与试剂  液相色谱仪( 安捷伦 HPLC  1200) 、马弗炉、气浴恒温振荡器THZ-82A( 金坛医疗仪器厂) 、旋转蒸发器Ｒ-201( 上海申胜生物技术有限公司) 、层析柱、分液漏斗、容量瓶、平底烧瓶 等。
四螨嗪标准对照品( Buprofezin) 含量99. 0%。硅胶( 200 ℃烘2 h，加5%水脱活) 、丙酮( 分析纯) 、无水硫酸钠( 分析纯) 、石油醚( 分析纯) 、二氯甲烷( 分析纯) 、甲醇( 色谱纯)
1.2 色谱条件
月旭色谱柱: Ultimate  XB-C18 4.6×250mm，5um  Part  Number 00201-31043 Serial Number 211302350; 流动相∶ 甲醇∶ 水= 80 ∶ 20; 流速:0.8 ml /min; 最大吸收波长: 273 nm; 进样量: 10 μl。
1. 3 测定方法
1. 3. 1 样品的制备将采来的土壤样品经去除碎石、杂草( 根) 、败叶等后，充分搅拌混匀，用四分法取1/4 作为待测样品，低温保存( －20 ℃，下同) 。把柑橘样品切成4 块，四分法取1/4 作为待测样品，放入匀浆机匀浆0. 5 min，转入500 ml 塑料瓶中，低温保存。
1. 3. 2 样品处理
1. 3. 2. 1 提取称10 g 柑橘( 土样10 g) 放入100 ml 锥形瓶中，加入40. 0 ml 丙酮，振荡1 h，提取液经布氏漏斗抽滤，滤液移入500 ml 分液漏斗中，加100 ml 5%NaCl、50 ml石油醚，充分摇匀1 min，静置10 min，弃去水相，有机相经无水硫酸钠取水后转入平底烧瓶中，在35 ℃水浴旋转蒸发仪上浓缩干，待过柱净化。
1. 3. 2. 2 净化方法200 mm15 mm( 直径) 玻璃柱，底部垫约0. 5 cm 高脱脂棉，依次填装1 cm 高无水硫酸钠、2 g 硅胶，顶端加1 cm 高无水硫酸钠，先用10 m石油醚预淋柱子，弃去淋洗液。分别用2 或3 ml 的石油醚分两次洗涤圆底烧瓶，将其移入柱中，弃去淋出液; 用20 ml 石油醚∶ 二氯甲烷丙酮( 4 ∶ 1 体积分数)淋洗柱子，弃去; 用10 ml 石油醚∶ 二氯甲烷丙酮( 2 ∶ 3体积分数) 洗脱目标物，收集，在35 ℃水浴中旋转蒸发浓缩干。用色谱甲醇定容至2. 0 ml，过0. 2 μm 滤膜，装瓶，供液相色谱分析。
1. 3. 3 标准曲线制备  称取四螨嗪( 含量99. 0%)100 mg 于100 ml 容量瓶中，甲醇定容至刻度，即为1. 00 mg /ml 标准贮备液。四螨嗪标准储备液用甲醇稀释成0. 05、0. 1、0. 2、0. 5、1. 0、2. 0、5. 0、10 μg /ml 的标准系列，在本方法所确定的实验条件下，进行面积测定，并绘制标准曲线。
1. 3. 4 样品测定自动进样器设置进样量为10 μl，以保留时间定性，以样品溶液峰面积与标准溶液峰面积比较定量。
2 结果与讨论
2. 1 提取方法的确定
2. 1. 1 净化柱子的确定净化苹果中杂质较理想的净化小柱为氨基小柱，其原理是靠氨基小柱吸附杂质再用甲醇－ 二氯甲烷( 1 + 99) 洗脱目标物，氨基小柱对桔土的杂质去除效果还可以，回收率为80%; 但是对柑橘样品杂质保留不多，大量杂质都被淋洗下来，会对四螨嗪的目标峰有较大干扰，所以不选择该净化方法，而是选择自填硅胶柱来净化，方法中用20 ml 石油醚∶ 二氯甲烷丙酮( 4 ∶ 1 体积分数) 淋洗柱子，去除柑橘中大部分杂质，再用10 ml 石油醚∶ 二氯甲烷丙酮( 2 ∶ 3 体积分数) 洗脱目标物，收集，结果四螨嗪的目标峰附近不再有干扰峰，净化效果较好［3］。
2. 1. 2 提取溶剂的确定实验中比较了乙腈和丙酮两种不同有机溶剂对四螨嗪在样品中的提取效果，乙腈提取回收率不高，只有土壤达到84%，全果的回收还不到30%，而丙酮的回收都较理想，都在90% 以上，所以选用丙酮作为提取试剂［3］。
2. 1. 3 石油醚萃取次数确定比较石油醚萃取步骤时，发现提取1 遍的总体回收率就在90%以上，比提取两遍仅低8%，考虑到做样品的效率问题，故决定萃取1 次。
2. 2 色谱图在1. 2 色谱条件下进行测定，四螨嗪的保留时间为7. 9 min。见图1。



              图1  四螨嗪 标准样品峰面积图

2. 3 线性范围和最低检测限按1. 3. 3 配制标准系列，在本方法所确定的实验条件下，平行测定3 次，进行面积测定，并绘制标准曲线。见图2。直线回归方程为Y = 39. 485 7X － 0. 110 1，相关系数r = 1. 000 0。本法以3 倍基线噪音所对应待测物质浓度为方法的最低检出限为0. 01 mg /kg。



                    图2  四螨嗪标准曲线

2. 4 回收率和精密度试验  按照1. 2 色谱条件和1. 3测定方法，对柑橘和土壤各同一份样品加入低、中、高3组浓度进行回收试验，重复操作6 次。土壤平均回收率分别为92. 1% ～ 95. 9%，柑橘平均回收率分别为92. 0% ～ 95. 4%，土壤ＲSD 为0. 39% ～ 6. 81%，柑橘ＲSD 为0. 42% ～ 5. 73%。见表1。

表1  加标回收率和精密度试验结果

样品	本底值 （ug）	加入量 （ug）	加标测得值（ug）						平均回收率（%）	相对标准偏差（%）
			1	2	3	4	5	6
土壤	＜LOD	0.05	0.045	0.046	0.050	0.049	0.051	0.049	95.5	2.17
土壤	0.5	0.48	0.048	0.479	0.483	0.483	0.483	0.483	95.8	0.39
土壤	＜LOD	2.01	1.912	1.945	1.692	1.896	1.923	1.674	92.1	6.81
柑橘	＜LOD	0.05	0.051	0.048	0.051	0.051	0.046	0.046	95.3	5.52
柑橘	＜LOD	0.50	0.462	0.464	0.463	0.463	0.455	0.465	92.1	0.84
柑橘	＜LOD	2.01	1.859	1.847	1.847	1.865	1.859	1.843	92.5	0.42

3 结论
    本方法采用液相色谱法紫外检测器测定土壤和柑橘及其制品中的四螨嗪残留量。根据土壤和柑橘样品的情况及农药性质选择多种吸附剂粉末及用量，减少了杂质干扰，色谱峰分离效果好，具有良好的精密度、较低的方法检测低限和较高的回收率。通过实际验证，本方法适用于对柑橘和土壤四螨嗪残留量的测定。
参考文献
［1］ 李凯年，姜荃． 国外对食品农药残留控制的发展趋势［J］ ． 世界农业，2003( 5) : 44 － 46．
［2］ 图雅，赵宏，胡芬，等． 高效液相色谱法测定禽肉中的已烯雌酚残留［J］． 中国卫生检验杂志，2012，12( 22) : 2804 － 2805．
［3］ 邓立刚，耿越，李增梅． 高效液相色谱法测定苹果中四螨嗪残留量［J］． 理化检验化学分册，2009，45( 2) : 151—152．

请问是您摘录的还是发表的论文哈？

应该是原创的作品吧

原文由 东风恶(luoleqc) 发表:
请问是您摘录的还是发表的论文哈？

第七届的原创  要求格式 就是这样的啊。

原文由 东风恶(luoleqc) 发表:
请问是您摘录的还是发表的论文哈？

没什么问题吧。

原文由 我是风儿(nphfm2009) 发表:
应该是原创的作品吧

还是你有见解哈。

农残一般不是都是气相法检测的吗？这个液相的方法有什么优势吗？

原文由 会师楼(hjx1988) 发表:

原文由 东风恶(luoleqc) 发表:
请问是您摘录的还是发表的论文哈？

第七届的原创  要求格式 就是这样的啊。

要求还挺严格的哈

原文由 逆天一棍(fengmo4668) 发表:
农残一般不是都是气相法检测的吗？这个液相的方法有什么优势吗？

我也想这么问 气象会更简单一些俄吧