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凝胶色谱（GPC）

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主题：【讨论】水相GPC问题请教 pH调节的作用加盐的作用

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polydiene

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发表于：2014/11/07 23:43:42 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

hi，用过水相GPC的老师们来帮我看看啊

我最近用水相GPC做了次实验，做了个葡聚糖的宽标，用的是PL的水相柱

用纯水做流动相峰形分岔了，加盐后变好了一些，但还不是单峰分布；我看了PL水相柱的一些资料上面提到“中性样品用纯水；阴离子型样品用0.1M的NaNO3，0.01M的NaH2PO4，pH=7-9,；阳离子型样品pH=2-7” 调节pH值目的是什么啊？

阴离子型样品比如是羧酸类，不应该往酸了调，保持中性，这样才跟柱子没有作用吗？

水相柱表面会带电荷吗？

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2014/11/10 11:28:37 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

水溶性的高分子有机物，含有化学键，为了消除盐效应，所以加入盐到流动相中去抵消化合物和填料的化学键作用，看你的结果，可以再加大点盐的浓度。

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histone1

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2014/11/10 15:46:14 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 polydiene(v2856191) 发表:
hi，用过水相GPC的老师们来帮我看看啊

我最近用水相GPC做了次实验，做了个葡聚糖的宽标，用的是PL的水相柱

用纯水做流动相峰形分岔了，加盐后变好了一些，但还不是单峰分布；我看了PL水相柱的一些资料上面提到“中性样品用纯水；阴离子型样品用0.1M的NaNO3，0.01M的NaH2PO4，pH=7-9,；阳离子型样品pH=2-7” 调节pH值目的是什么啊？

阴离子型样品比如是羧酸类，不应该往酸了调，保持中性，这样才跟柱子没有作用吗？

水相柱表面会带电荷吗？

很好的问题！

首先，0.1M的NaNO3盐浓度已经足够了，因为Dextran的浓度最多几个mM，足够屏蔽电荷了。所以，裂峰，找找其他原因。Dextran浓度多少，降低浓度试试。

然后，酸性样品，pH往碱调，才能保持中性。同理，阳离子样品，pH要往低调。

最后，水柱的基质一般是聚乙烯醇或者丙烯酸酯类，是带电荷的，是会和样品相互作用的。比如，如果你在中性条件做阳离子型样品，会发现样品的吸附。

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2014/11/10 15:47:34 Last edit by histone1