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主题：【分享】Innoval AQ C18分析头孢羟氨苄的实验报告——中国药典2010版二部标准

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博纳艾杰尔

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发表于：2014/12/30 13:34:08 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

前言

本次实验报告是在原有实验数据上进一步完善相关测试后发布的第二次更新，主要的改进是采购了标准规定的对照品完成了分离度溶液考察。对照品测试结果表明α-对羟基苯甘氨酸和7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸的保留和分离均符合要求。

摘要：本实验按照头孢羟氨苄2010版中国药典方法进行，选择Innoval AQ C18 (5 μm，100Å，4.6×150 mm) 柱对样品进行测定，同时进一步考察了该色谱柱用于头孢羟氨苄分离度溶液、含量和有关物质等项测试的结果，并初步考察了色谱柱的使用寿命。结果表明Innoval AQ C18基本适用于头孢羟氨苄的分析：（1）在含量测定分离度溶液中，Innoval AQ C18对主峰前杂质峰的分离度为24.06，符合标准要求；（2）在有关物质分离度溶液中，Innoval AQ C18对主峰前主要杂质峰的分离度分别为12.37和24.72，符合标准要求；（3）含量测定中，头孢羟氨苄保留时间8.833，柱效6916，拖尾因子0.965，符合标准要求；（4）有关物质测定中共检出4个杂质，分离度均符合标准要求；（5）用于头孢羟氨苄含量测试时，连续进样350针，保留时间、柱效和拖尾因子均无显著变化，表明Innoval AQ C18对该样品和流动相有较好耐受性。

关键词：头孢羟氨苄；Innoval AQ C18；液相色谱法

1. 样品基本信息

表1. 头孢羟氨苄样品信息

2.实验部分

2.1仪器、试剂与材料

2.1.1 主要仪器设备

Agilent 1260高效液相色谱仪，紫外检测器

2.1.2试剂材料

超纯水、甲醇、磷酸二氢钾、氢氧化钾、无水磷酸氢二钠、磷酸；

色谱柱：Innoval AQ C18；5 μm，100 Å，4.6×150 mm。

2.2 样品制备

含量测定供试品溶液的制备：取本品适量，精密称定，加流动相A溶解并定量稀释制成每1ml中含0.3mg的溶液；

有关物质供试品溶液的制备：取本品适量，精密称定，加流动相A溶解并定量稀释制成每1ml中含1mg的溶液；

对照品溶液(1)的制备：精密称取α-对羟基苯甘氨酸对照品约10mg，置10ml量瓶中，加流动相A适量超声使溶解并稀释至刻度，摇匀；

对照品溶液(2)的制备：精密称取7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸对照品约10mg，置10ml量瓶中，加pH7.0磷酸盐缓冲盐(取无水磷酸氢二钠28.4g，加水800ml使溶解，用30%磷酸调节pH值至7.0，用水稀释至1000ml混匀)适量超声使溶解，摇匀；

杂质对照品溶液：精密量取对照品溶液(1)和对照品溶液(2)各1ml，置100ml量瓶中，用流动相A稀释至刻度，摇匀；

含量测定分离度溶液的制备：取头孢羟氨苄对照品和7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸对照品各适量，加pH7.0磷酸盐缓冲盐适量超声使溶解，再用流动相A溶液稀释制成每1ml中约含头孢羟氨苄0.3mg与7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸0.1mg的混合溶液；

有关物质分离度溶液的制备：取杂质对照品溶液与供试品溶液按照9:1混合，摇匀。

2.3色谱条件

2.3.1含量测定色谱条件

流动相：0.02mol/L的磷酸二氢钾溶液(1mol/L氢氧化钾调pH至5.0)-甲醇(98:2)，等度洗脱

检测波长：230 nm

柱温：30℃

进样量：10 μl

流速：1.0 ml/min

色谱柱：InnovalAQ C18, 5 μm,100Å，4.6×150mm

2.3.2有关物质测定色谱条件

流动相：流动相A：0.02mol/L的磷酸二氢钾溶液(1mol/L氢氧化钾调pH至5.0)

流动相B：甲醇，梯度洗脱

检测波长：220 nm

柱温：30℃

进样量：20 μl

流速：1.0 ml/min

色谱柱：InnovalAQ C18, 5 μm,100Å，4.6×150mm

备注：洗脱梯度如下表

3 实验结果

3.1 系统适用性测定

3.1.1 系统适应性测定图谱

图1. 空白(流动相A)测定图谱

图2. 含量分离度溶液测定图谱

图3. 有关物质分离度溶液测定图谱

3.1.2系统适应性测定结果

3.2 含量测定

3.2.1含量测定图谱

图4. InnovalAQ C18用于头孢羟氨苄含量测定图谱

3.2.2含量测定实验结果

表4. Innoval AQ C18用于头孢羟氨苄含量测定积分结果

3.3 有关物质测定

3.3.1有关物质样品测定图谱

图5. InnovalAQ C18用于头孢羟氨苄有关物质测定图谱

3.3.2有关物质样品测定实验结果

表5.InnovalAQ C18用于头孢羟氨苄有关物质测定积分结果

3.4 色谱柱批次重现性验证结果

3.4.1不同批次色谱柱测定图谱

图6. 第1批次色谱柱测定图谱

图7. 第2批次色谱柱测定图谱

图8. 第3批次色谱柱测定图谱

3.4.2色谱柱批次重现性测试结果

表6. InnovalAQ C18用于头孢羟氨苄批次重现性测试积分结果

3.5 色谱柱寿命测定结果

3.5.1色谱柱寿命测试图谱

────────────────────────────────────────────────────
保留时间峰面积峰高理论塔板数峰拖尾因子
────────────────────────────────────────────────────
7.543 775145 54029 6451 1.00
────────────────────────────────────────────────────

图9. 第1针测定图谱

────────────────────────────────────────────────────
保留时间峰面积峰高理论塔板数峰拖尾因子
────────────────────────────────────────────────────
7.473 751222 52847 6448 1.00
────────────────────────────────────────────────────

图10. 第50针测定图谱

───────────────────────────────────────
保留时间峰面积峰高理论塔板数峰拖尾因子
───────────────────────────────────────
7.362 763115 55065 6584 1.01
───────────────────────────────────────

图11. 第100针测定图谱

────────────────────────────────────────────────────
保留时间峰面积峰高理论塔板数峰拖尾因子
────────────────────────────────────────────────────
7.638 757364 50675 6095 1.00
────────────────────────────────────────────────────

图12. 第200针测定图谱

────────────────────────────────────────────────────
保留时间峰面积峰高理论塔板数峰拖尾因子
────────────────────────────────────────────────────
7.657 745376 49443 6020 1.00
────────────────────────────────────────────────────

图13. 第300针测定图谱

────────────────────────────────────────────────────
保留时间峰面积峰高理论塔板数峰拖尾因子
────────────────────────────────────────────────────
7.539 755722 51896 6254 1.00
────────────────────────────────────────────────────

图14. 第350针测定图谱

3.5.2色谱柱寿命测试结果

表7. InnovalAQ C18用于头孢羟氨苄寿命测试积分结果