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主题：【第七届原创】血清中纳曲酮及其代谢物6-β-纳曲酮醇的高效液相色谱分析

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发表于：2014/12/30 21:31:31 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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血清中纳曲酮及其代谢物6-β-纳曲酮醇的高效液相色谱分析



    纳曲酮是一种阿片受体拮抗剂，其用于酒精中毒治疗及阿片类药物依赖已有几十年的历史，一些临床试验已证明纳曲酮是一种有效的酒精中毒辅助用药。临床已经证明纳曲酮相比安慰剂能够减少嗜酒复发率和对酒精的渴望。服用纳曲酮后经过快速和广泛的肝脏代谢由酶将酮还原为主要代谢物6-β-纳曲酮醇及其他代谢产物：（如下图）






    与纳曲酮相比6-β-naltrexol阿片受体拮抗剂作用较弱，但其仍对于疗效有贡献，因为其在体内浓度甚至高于纳曲酮。纳曲酮及其代谢物大多是以共轭形式存在。在肝硬化及其他严重的肝脏疾病中这种纳曲酮到6-β-naltrexol的代谢会有减少。

随着药物治疗临床检测的发展，本次试验意于开发一种纳曲酮到6-β-naltrexol在人体血清中的同时检测手段。

材料与方法：纳曲酮、6-β-纳曲酮醇、色谱甲醇

纳曲酮和6-β-纳曲酮醇储备溶液制备成含1 mg/ml的甲醇溶液。储备溶液用于制备标准曲线溶液，浓度范围0-1ug/ml, 所有的校准标准，空白和质量控制样品， 均配置在空白血清中；所有缓冲液，制备用去离子水。

临床采样：

样品来自87个酗酒后的受试者，酗酒者采用双盲实验，设安慰剂对照组和药物治疗组，来评估对酒精依赖的作用。入选标准为18-65岁酒精依赖者。纳曲酮（盐酸纳曲酮）是

每天早上50毫克口服，为期三个月。血液样品收集于服药后约2-4小时，空白血清样品采集于第一周、第二周和第八周，并使其凝固，离心（4000转/min，10分钟）。所有样品储存

在-70℃直至分析。

萃取：

所有的标准以及临床样品均取自1ml血清，样品的pH通过的0.5M的Na 2 HPO 4⋅2H2 O调至pH值9，将样品用5ml乙酸丁酯（含烯丙吗啡1ug/100ml作为内标提取）. 涡旋混合（30秒），将样品离心(4000转/min)，将上层乙酸丁酯层转移到一个干净的测试管然后反萃取到150微升的0.1M高氯酸中。然后涡旋混合（30秒）并离心，上层舍去。下层转移至液相进样小瓶中，进样25ul。

色谱条件：Hewlett-Packard 1090高效液相色谱仪，配EsaCoulochem 5100A

电化学检测器，流动相为乙腈:磷酸二氢钾溶液（19mM）=20：80，其中含有1-辛基磺酸钠、四乙基硫酸氢铵各5 mM。HypersilOD色谱柱（150*4.6mm,5um）,流速1ml/min。

结果与讨论：

1、 对照样品及试验样品的色谱图如下：











5、 日间精密度的测定通过分析同一标准浓度的血清15次（30天），甲标准血清，掺有为100ng/ ml的和6-β-纳曲酮，储存在-20℃。发现平均浓度分别为98.8和98.9纳克/毫升，检测日间精度分别为为5.7％和4.2％，实验环境的微小变化对结果没有影响。

6、 由验证结果可以看出本方法适用于血清中纳曲酮和6-β-纳曲酮的测定。



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2014/12/31 20:59:47 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这个方法可能在实验过程中还是会出现问题，周围的小峰很大啊
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