原文由 rowa123456 发表:
楼主你好,谢谢你对凝胶色谱及其原理的解读,我还有几个问题想请教下:
1.流动相的选择对分离效果有何影响?2.应该如何选择流动相?3.流出速度的控制对分离度有何影响?4.上样量跟固定相有何关系?谢谢!
流动相的选择可不简单啊!GPC绝不是找一种溶剂能把样品溶解了就可以做的!长期的科学实践发现:GPC要想做的好,流动相/溶剂很重要,特别是采用示差折光检测器时,示差折光指数的浓度增量,即:dn/dc值基本决定了流动相/溶剂与样品的匹配程度,即当dn/dc值小于0.05时,就基本不能用GPC来分析样品了;只有大于0.05时,才能用GPC做。因为此时,RI检测器的信号才与样品浓度基本成正比,RI才有意义,否则就不能使用了。而dn/dc值是与流动相/溶剂与样品的化学性质有关的,需要摸索方法。例如:以前,国内外基本都用间甲苯酚作溶剂/流动相来分析尼龙和涤纶聚酯,但是国外的科学家后来发现这不是一个好方法,重现性太差,就是因为虽然间甲苯酚较好地溶解了样品,但是dn/dc值太低,使得RI检测器信号不稳定,重现性较差。于是开始摒弃这个溶剂,开发新溶剂。目前,六氟异丙醇和甲酸已经取代了间甲苯酚,在国外成为了尼龙和聚酯涤纶的溶剂/流动相用于GPC和特性粘度的分析。因此,在条件允许的情况下,一般用户也可以考虑配个折光仪,或者dn/dc值机等等。至于流动相里面加入的辅助材料,就更复杂了。
选择流动相,比较复杂,最稳妥的是咨询相关仪器厂家、查找相关文献等等方法。但是也可能需要自己摸索了。
流速影响也比较明显,有时需要提高流速到2ml/min,一般地,1ml/min就可以了。主要是与分离效果有关。
进样量很重要,与柱子的分离能力、检测器的量程都有关系。对于有粘度、光散射检测器的高级GPC,浓度更是必须准确地知道的,因为浓度参与分子量的计算!此时,温度也很重要,特别是对于高温GPC,如果配置样品时没有充分溶解、没有准确可靠的温度-体积折算,那么测试是很不准确的!这些,就说来话长了。