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液相色谱（LC）
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主题：【已应助】请高手求教，标品和样品加标两者保留时间差距大，出峰不在同一位置

浏览0 回复5 电梯直达
lsj223
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发表于：2015/05/20 21:13:42 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
如标题  做西葫芦的 灭蝇胺    NY/T 1275-2009
色谱柱  waters刚买不久的氨基色谱柱；流动相：乙腈-水（98+2）；流速：0.5ml/min; 进样：20ul; 紫外检测器波长：215nm;柱温：35度，
跟标准有些微区别，优化了些，因标准中出峰太靠前，
问题：  已经连着做了两天，标品出的峰很好，但加标出的峰保留时间和标品差的很大
再下如图：
标准曲线：0.1、0.3、0.5 ug/ml

样品（西葫芦）图谱：

给上面样品的进样小瓶中直接加了标样大概在0.5ug/ml，保留时间差了，不知什么原因？

样品加标：进样小瓶中应为0.4ug/ml

结果标品右边出了个峰

上图样品进样小瓶中再加了点标品




标品右边峰变大了（粉红色线）
  又走了一次的结果

标品用乙腈稀释，定容是流动相，采取的排除措施：
1  把标品用流动相稀释，保留时间和以前一样
2  加标的样品进样小瓶用氮气吹干，换上乙腈稀释，保留时间还是跟原来一样
请高手指点？？？？？？？？？？？？？？

推荐答案：浪淘沙隐回复于2015/05/21
多半是因为标样中因为不含其它物质，溶液略显碱性；而样品中含有其它物质，溶液pH和标样不一样，而流动相又没有缓冲能力，进标样时标样溶液使流动相pH提高，所以灭蝇胺这个碱性物质保留增强；进样品溶液时，流动相pH相对低一些，所以灭蝇胺保留弱一些。
解决这个问题的方法是，使用缓冲盐，使得流动相pH不会被样品溶液改变pH，建议可以使用10mmol/L的磷酸二氢钾，用氢氧化钾调pH到7.0。
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2015/5/21 8:45:12 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
多半是因为标样中因为不含其它物质，溶液略显碱性；而样品中含有其它物质，溶液pH和标样不一样，而流动相又没有缓冲能力，进标样时标样溶液使流动相pH提高，所以灭蝇胺这个碱性物质保留增强；进样品溶液时，流动相pH相对低一些，所以灭蝇胺保留弱一些。
解决这个问题的方法是，使用缓冲盐，使得流动相pH不会被样品溶液改变pH，建议可以使用10mmol/L的磷酸二氢钾，用氢氧化钾调pH到7.0。
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浪淘沙隐
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2015/5/21 8:46:40 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
额，是氨基柱呢。氨基柱我没怎么用过，不敢保证是这个原因，但是也可以试一试。
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2015/5/21 9:40:59 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
视乎样品色谱图中根本就没有与标样成分相同的峰，怀疑是否样品中根本就没有你要分析的成分哦？
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夏天的雪
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2015/5/21 13:04:50 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
样品比标准品复杂，这种现象很常见，可以往空白样品中加入标品处理后做标曲
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hujiangtao
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2015/5/25 13:22:47 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
把标样加到样品上机液中看看峰能否重合
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