案例分析案例分析一我做的是苯酚羟基化反应,产物中有苯酚,苯二酚(邻,对),苯醌,焦油,用安捷伦1100
液相色谱分析,外标法计算选择性和转化率。但一直以来,计算出的结果老是差强人意。偶尔算出一个好的结果,但是一重复又不行了,有时候重复做几次都不一样,很是郁闷。最近又老算出来选择性超过100%。开始怀疑稀释误差的问题(样品是稀释以后去测的),但现在操作的时候非常小心了,怀疑标准曲线的问题,但是重新做了好几条了。结果就是很奇怪,自己想了想:1.因为
液相色谱仪是公用的,所以特意买了专用的色谱柱。但经常测的时候发现柱压不一样,是不是因为这个影响了峰面积,进而影响了结果?柱压的影响这么大么?2.是不是外标法就不准确?该用单点校正法?之前觉得每次测样前都配一个标样有点麻烦,所以没用。3.还是别的什么原因?补充:用的柱子是ZORBAX SB-C18, 用的甲醇:水=3:7,每个峰都分的很开。取样后离心去掉催化剂,再定量稀释然后去测的。
网友七嘴八舌:
- 有时候确实柱压不同会对结果有影响,但这是柱压差别很大的情况才会发生。是不是柱子没冲洗好,或者需要看是否进气泡了,因为这都可能导致结果不准。
- 如果柱压的差别很大的话,比如30bar已经很大了,平时用的时候,有柱温箱,一般都控制温度恒定的,基本同意条件不会有这么大的变化,最多10bar上下浮动,通常小于5bar。
- 是不是走过缓冲盐的流动相?用水低流速长时间冲洗,再换乙腈冲洗试试看。是不是有些不物残留在柱子中没有及时冲洗导致柱压偏高,可以尝试用异丙醇试试。
- 柱压变化主要会影响保留时间,对峰面积影响不大。你所说的重复性不好,是
液相进同一个样品重复不好还是不同的样品。如果不同的样品那是你反应的问题。至于选择性超过100%?是否是计算方法错误?
- 简单来说,计算苯二酚的选择性:
假设对苯峰面积代入标准曲线得浓度C1(g/ml);邻苯峰面积对应浓度C2,苯酚峰面积对应浓度C,溶液总体积V,稀释倍数20,初始苯酚加入量m(g),如下
- 计算公式如果没错,可以看看是否自己没有做过空白以及反应投料时的组分测试。
- 至于单点还是外标法?
单点校正比较简单,如果要求不是很严格的话,单点校正可以满足要求。单点标准浓度如果在被测样品浓度附近,结果比外标法更准确。做考核样时,我们一般先用外标法定出大致浓度范围,再以单点法定量。
单点一般适用于线性曲线截距在100%浓度点2%以下的。高于20%不能采用单点校正和外标。外标法对照和拱式样品浓度应一致,校正曲线线性符合即可。