常规C18 柱在流动相pH 值低于2 或高于7.5 的条件下使用时会发生键合相水解或硅胶溶解的现象,造成柱效和分离度下降,柱子使用寿命大大缩短。
色谱柱生产厂家往往通过使用独特的化学键合技术,拓宽硅胶键合色谱柱的pH范围。
然而,在色谱柱制造领域,拥有一个较宽的pH 适用范围并不罕见,但使用者往往关心的是在较高或者较低的pH 条件下色谱柱能否保持长久的耐受性和稳定性。因而色谱柱的pH范围的确认就是在极高或极低的pH条件下连续冲洗色谱柱,然后通过一些列测试数据的信息来确认在该pH条件下色谱柱是否可以耐受!
下图是一款pH范围为1.5-9.0的色谱柱的pH范围确认实验,分别在pH 1.5 和pH 9.0 的条件下连续冲洗1440 小时以上,并跟踪检测柱效、保留时间、对称性和容量因子的变化。结果显示,在这两个pH 条件下该色谱柱具有长久的耐受性和稳定性。
色谱柱 Diamonsil C18(2), 150 x 4.6 mm ID, 5 μm
流动相 乙腈/ 20 mM 磷酸缓冲液(pH 7.0)=40/60
流速 1.0 mL/min
柱温 室温
检测器 UV 254 nm
样品 1. 尿嘧啶
2. 吡啶
3. 苯酚
4. 苯