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主题：【原创】对抗超级细菌的万古霉素（饲料中）的测定

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happytiankong1

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发表于：2015/08/04 14:27:51 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

万古霉素是由链霉菌产生的、结构复杂的糖肽类抗生素,易溶于水,甲醇中极微溶解,乙醇或丙酮中几乎不溶.万古霉素主要抑制细菌细胞壁合成,由于万古霉素有较强的抗菌作用,在人医临床上也较少使用,而且同氨基糖苷类药物一样,具有严重耳毒性及肾毒性,故只宜在其他抗生素对病菌无效时才会被短期使用于抢救,也就是所谓的最后一线药物.
近年来,一些养殖者和饲料生产企业在动物饲喂过程或加工生产中,为追求利润,将万古霉素添加到饲料中应用,长期使用的后果是使需要万古霉素来治疗的一种能够致死的细菌产生抗药性,变异成万古霉素抗药性肠球菌(VRE),对人类生命安全造成了极大的威胁.因此,建立饲料中万古霉素的测定方法是非常必要的.
1、适用范围
适用于饲料中万古霉素的检测。
2、提取
称取1 g 均质样品于15 mL 离心管中，加入8 mL 乙酸提取液* 和4 mL 三氯甲烷；振荡4 min， 4,000 rpm
下离心4 min，收集上清液；下层残留物用5 mL、5 mL 乙酸提取液重复提取两次，合并三次提取液；作为上样液，
待净化。
* 乙酸提取液：10% 乙酸溶液（用50% 甲醇水溶解）
3、净化
ProElut PXC 500 mg/12 mL (Cat.#68207)
a 活化：依次加入6 mL 甲醇，6 mL 水，流出液弃去；
b 上样：将上样液加入柱中，流出液弃去；
c 淋洗：依次用10 mL 水，3 mL 甲醇淋洗，流出液弃去；
d 洗脱： 10 mL 10% 氨水（甲醇/ 水= 3/7）溶液洗脱，收集洗脱液；
e 重新溶解：50 oC 下用减压蒸馏将洗脱液浓缩近干，然后用1% 乙酸重新定容至1 mL，上机供HPLC 分析。
4、色谱条件
色谱柱：Spursil C18 250 x 4.6 mm ID, 5 μm (Cat. #82001)
流动相：50 mmol/L 磷酸二氢钾(1 L 磷酸二氢钾溶液需加入300 μL 磷酸)/ 乙腈= 92/8
流速：1.0 mL/min 进样量：20 μL 柱温：30 oC 检测器： UV 210 nm

5、添加回收结果
5.1 添加水平为1.0 mg/kg 饲料中万古霉素检测的液相色谱图

回收率：71.6%（注：被仪器的logo遮住了）
5.2 添加水平为10.0 mg/kg 饲料中万古霉素检测的液相色谱图

回收率：69.4%（注：被仪器的logo遮住了）

5.3 饲料中万古霉素检测（空白样品）的液相色谱图

5.4 万古霉素标准品10.0 mg/L 的液相色谱图

5.5 万古霉素标准品1.0 mg/L 的液相色谱图

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2015/8/4 14:29:16 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

万古霉素（Vancomycin）是抗生素的一种，在印度等南亚国家出现的 “超级病菌”NDM-1，已经蔓延到英国、美国、加拿大、澳大利亚、荷兰等国家，国内专家称南亚超级病菌不会大流行，万古霉素能见效。

万古霉素属于糖肽类大分子抗生素，万古霉素的药力较强，在其他抗生素对病菌无效时会被使用。

也就是所谓的最后一线药物。由于抗生素过于滥用，因此已出现了可抵抗万古霉素的细菌，如耐万古霉素肠球菌（VRE），造成传染病防治的隐忧。

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