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主题：【分享】怎么提高免疫亲和柱的回收率（以黄曲霉毒素B1为例）

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普瑞邦
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发表于：2015/08/14 13:55:54 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
本产品的测定的基础是抗原抗体反应，黄曲霉毒素单克隆抗体连接在柱内凝胶上，样品中的黄曲霉毒素经过提取、过滤、稀释，然后将样品提取液缓慢的通过黄曲霉毒素免疫亲和层析柱，在免疫亲和柱内，毒素与抗体结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他物质。用甲醇洗脱黄曲霉毒素，然后注入到分析仪器中用于检测。
操作程序：符合GB/T 18979-2003 国标方法
----将免疫亲和柱连接于泵流操作架的10mL 注射器下。
准确移取10mL 样品提取液注入注射器；
1.富集:将空气压力泵与注射器连接，调节压力使提取液以约2-3mL/min(1 滴/3 秒)流速缓慢通过免疫
亲和柱，直至2-3mL 空气通过柱体；
2.洗涤: 用10mL PH7.0 PBS 清洗，再以10mL 水淋洗柱子2 次，弃去全部流出液，并使2-3mL 空气通过柱子
3.洗脱可采取以下方式之一进行: 优选2
      A.洗脱1: 准确加入1.0mL 色谱级甲醇洗脱,孵育30秒以上(孵育即甲醇在柱子中浸泡),然后以流速为
1-2mL/min 过柱，收集全部洗脱液供检测用。
      B.洗脱2: 为保证洗脱充分,建议以1.5mL 色谱甲醇分两步进行洗脱，流速为1-2mL/min(1 滴/秒,重力即
可) 。首先，加入0.5ml 甲醇洗脱，重力过柱，当溶剂通过柱子后，等待30 秒后再加入1ml 甲醇进行洗脱，过柱前孵育30 秒以上(孵育即甲醇在柱子中浸泡)。收集全部甲醇洗脱液供检测用。
注：1.如样品处理后仍然很粘稠，请加大离心力及离心时间，或选择减少加入亲和柱中的样品量，避免出现亲和柱堵塞。
2.如样品本底复杂，洗涤步骤可全部采用PBST 清洗。
3.亲和柱可短期内于常温保存，长期保存建议2-8℃储存(5-6℃最佳)，不可冻存;
4.使用前，免疫亲和层析柱需回至室温（22-25℃）。
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2015/8/17 10:32:55 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
你是说主要就在富集，洗涤，洗脱3步中提高这个回收率的注意细节吧
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普瑞邦
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2015/8/17 12:08:01 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 奶茶大神(v3031919) 发表:
你是说主要就在富集，洗涤，洗脱3步中提高这个回收率的注意细节吧
对，主要就是这个。其他的就看柱子的质量了，那不是我们能掌控的。这些细节是我们可以掌控的。
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普瑞邦
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2015/8/17 12:14:53 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 普瑞邦(v3031891) 发表:
对，主要就是这个。其他的就看柱子的质量了，那不是我们能掌控的。这些细节是我们可以掌控的。
富集的时候最好重力过柱
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套子里的人
v3087494
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2017/2/20 13:35:27 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
请教一下你们配做标准曲线配制标液是用的甲醇去稀释还是按国标用98-2苯-乙腈去稀释啊，后者感觉与流动相的极性差太多了。
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