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主题：【分享】食品微生物菌种的复壮技术

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发表于：2011/01/20 07:23:26 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

1目的要求
（1）了解食品微生物菌种复壮技术的三种方法。
（2）熟悉微生物菌种复壮的一般方法。

2 基本原理
菌种在长期保存过程中会出现部分菌种退化现象。“退化”是一个群体概念，即菌种中有少数个体发生变异，不能算退化，只有相当一部分乃至大部分个体的性状都明显变劣，群体生长性能显著下降时，才能视为菌种退化。菌种退化往往是一个渐变的过程，菌种退化只有在发生有害变异的个体在群体中显著增多以至占据优势时才会显露出来。因此，尽管个体的变异可能是一个瞬时的过程，但菌种呈现“退化”却需要较长的时间。菌种退化的原因是有关基因的负突变。菌种退化的过程是一个从量变到质变的过程。最初，在群体中只有个别细胞发生负突变，这时如不及时发现并采取有效措施而一味的传代，就会造成群体中负突变个体的比例逐渐增高，最后占优势，从而使整个群体表现出严重的退化现象。菌种衰退最易察觉到的是菌落和细胞形态的改变，菌种衰退会出现生长速度慢，代谢产物
生产能力或其对宿主寄生能力明显下降。因此，在使用菌种前需对菌种进行复壮。
复壮就是通过分离纯化，把细胞群体中一部分仍保持原有典型性状的细胞分离出来，经过扩大培养，最终恢复菌株的典型性状，但这是一种消极的复壮措施；广义的复壮即在菌株的生产性能尚未退化前就经常有意识的进行纯种分离和生产性能的测定，保证生产性能的稳定或逐步提高。常用的分离纯化方法很多，大体上可分为三种：第一种分为两类，一类较粗放，一般只能达到菌落纯的水平，即从种的水平上来说是纯的。例如在琼脂平板上进行划线分离、表面涂布或与尚未凝固的琼脂培养基混匀后再倾注并铺成平板等方法获得单菌落；另一类较精细，是单细胞或单孢子水平上的分离方法，它可达到细胞纯的水平。第二种是通过宿主体内进行复壮，对于寄生性微生物退化菌株，可直接接种到相应的动植物体内，通过寄主体内的作用来提高菌株的活性或提高它的某一性状。第三种方法是淘汰已衰退的个体，通过物理、化学的方法处理菌体（孢子）使其死亡率达到80%以上或更高一些，存活的菌株，一般是比较健壮的，从中可以挑选出优良菌种，达到复壮的目的。食品微生物菌种的复壮主要是采用第一种方法。

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2011/1/20 7:23:54 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

3 实验材料
保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)（要求接种奶管已在冰箱中保藏两周）、MRS培养基、标准NaOH溶液、无菌移液管、漩涡振荡器、无菌培养皿、含9mL无菌生理盐水试管及接种针等。
4 实验方法与步骤
4．1 编号
取盛有9mL无菌水的试管排列于试管架上，依次标明10-1、10-2～10-6。取无菌平皿3套，分别用记号笔标明10-4、10-5、10-6。
4．2 稀释
待复壮菌种培养液在漩涡振荡器上混合均匀，用1mL无菌吸管精确的吸取1mL菌悬液于10-1的试管中，振荡混合均匀，然后另取一支吸管自10-1试管内吸1mL移入10-2试管内，依此方法进行系列稀释至10-6。
4．3 倒平板
用3支1mL无菌吸管分别吸取10-4、10-5、10-6的稀释液各0.1mL对号放入已编号的无菌培养皿中。无菌操作倒入溶化后冷却至45℃左右的MRS固体培养基10 mL～15mL,置水平位置，按同一方向，迅速混匀，待凝固后置于40℃培养箱中培养。
4.4 分离
取出培养48h 的培养皿，在无菌工作台上，用接种针挑取10个成棉花状较大的菌落，分别接种于液体MRS培养基中，置40℃培养箱中培养24h。
4.5 接种
按1%的接种量将纯化的培养物接种于已灭菌的复原脱脂乳中，同时接种具有较高活力的保加利亚乳杆菌于复原脱脂乳中作为对照。
4.6 活力测定
（1）观察：观察复原脱脂乳的凝乳时间。
（2）酸度：采用NaOH滴定法测定发酵乳液的酸度。
（3）计数：采用倾注平板法，测定活菌菌落数量。
5 实验结果
描述保加利亚乳杆菌菌落形态及单个保加利亚乳杆菌的形态。根据凝乳时间最短、酸度最高、活菌数最大挑选出优良菌株。
6 注意事项
(1) 在用吸管吸取稀释液时，吸管尖端不要碰到液面，以免吹出时管内液体外溢。
(2) 在使用吸管抽吸时吸管深入管底，吹时离开液面，使其混合均匀。

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2011/1/25 9:13:02 Last edit by wjwj1wj