主题：【分享】样品溶剂如何选择？

样品溶剂的选择是实验中不可忽视且很重要的部分，一方面靠经验，一方面还要考虑到所产生的溶剂效应。溶剂效应是什么？举个最简单的例子，很多时候，此效应可以导致峰形变差。而样品溶液的组成与进样体积都对会导致溶剂效应。


如何避免产生的样品溶剂效应？在HPLC分析中样品溶剂的选择和流动相是怎样的联系？GCMS、紫外检测都分别有哪些溶剂选择经验？本文告诉你!
样品溶剂的选择要求，先粗略的概括一下：
1、能够溶解待测物质；
2、不影响待测物质检测；
3、能够在一定时间范围内保持待测物质稳定。

什么是溶剂效应?

上图中，色谱图上较早洗脱的峰扭曲变形或者开叉，与此同时较晚洗脱的峰则较为尖锐与对称，这些现象显示一个比较特殊的起因――样品溶液的溶剂很可能强于流动相。此种强溶剂效应的例子在左图中可见。此处的样品溶液的溶剂是100％乙腈（100％的强溶剂），而流动相的组成则较弱，18％的乙腈与72％的水。第一个峰是开叉的，并且与第二个峰相比，明显地变宽了。当样品溶液的溶剂变成流动相时，所有的峰形都改善了，且变得尖锐。见右图。
为什么呢？这是因为当样品进样时,有可能出现峰展宽,最佳的样品溶液组成和体积将会保持在10%甚至更低,在这个例子里,当样品溶剂与流动相溶剂强度不同时,换句话来说,也就是样品未用流动相溶解,因此,有些样品分子溶解在强溶剂中,并随强溶剂流过柱子,而有些则溶解在流动相中,从而导致峰分叉.
当样品与流动相强度相差较小,进样影响也会小,第一个峰可能会宽于第二个峰,而当这种展宽导致必要的分离度降低时,这样情况应引起注意,在左图中,使用一根短柱,和5μL进样,这与最佳进样体积4μL相近,用了极性更强的溶剂导致分离度明显的降低,从2.1降到1.5(如右图,分离度为2或更大是评估一个完善方法的一个必要参数,也是每天方法的验证参数,1.5只是一个基本的分离度,任何一个方法或一根柱子都必需满足这个条件,当进样为一倍时,也就是10μL时,分离度更一步降低,此方法就不行了。

HPLC溶剂的要求

溶剂的极性要与待测样品相匹配，如果溶解度欠佳，样品会在柱头沉淀，不但影响纯化分离，且会使柱子恶化。

HPLC溶剂关键性能

反相液相色谱

HPLC里面的溶剂效应是如何产生的，该如何避免？
如何判断分叉的峰是否由溶剂效应造成，第一就是通过HPLC仪器比对一下两个劈叉峰的紫外吸收波谱，看看他们是否能完全一样的μV特征吸收，第二将进样体积调节到0.1μl看看，峰是否好转，如果满足上面两个条件几乎就可以肯定是100%的溶剂效应。
产生原因:1，样品溶液的溶剂很可能强于流动相。例如样品溶液的溶剂是100％乙腈（100％的强溶剂），而流动相的组成则较弱，18％的乙腈与72％的水
产生原因2，就是进样量比较大，
产生原因3，样品的pH值与HPLC流动相pH悬殊，比如酸性流动相体系，样品pH偏碱性（pH=10）,这种情况下也很有可能发生 其实上面三个原因归结起来就是一个原因，那就是样品的溶剂与流动相存在一些不一样，当样品进入流动相的时候，由于这种巨大的差异，一部分样品溶解进入了流动相，一部分还留在进样的溶剂里面，所以在HPLC上出现了保留的差异，所以要解决这个问题的最佳方案就是，使用流动相的起始梯度溶解样品，如果由于溶解度的问题，不得不改用其余的溶剂，那就只能降低进样体积来解决，比如 5μl，1μL。

GC-MS 测定PAHs，HP-5MS (Agilent) 柱，固相萃取后使用甲醇洗脱。用甲醇做溶剂，是否会影响柱效和柱寿命。是否是最佳选择？
甲醇的沸点比较高，极性比较大，如果换成正己烷类的弱极性，低沸点，配合一定的色谱条件可以实现溶剂聚焦作用，显著提高保留时间较短的化合物的灵敏度和检出线。
甲醇相对于正己烷等极性小的溶剂，造成的柱流失大，国外用乙腈做GC-MS溶剂的文献很多，很多用来减少前面溶剂转换步骤，结合大体积进样等，溶剂先挥发分流走掉，从而进入柱子乙腈溶剂的较少，可认为对柱子影响不大，同时甲醇乙腈对比，乙腈的柱流失要少。
我手头有个样品，其结构中只有孤立的C=O。由于样品溶于乙醇，所以第一次做紫外扫描时就以乙醇作为溶剂。结果在202nm处测得了最大吸收。检测该化合物的HPLC条件是以乙腈－水作为流动相的。我用流动相作为溶剂再对该化合物进行紫外扫描。结果在197nm处测得了最大吸收。而在200～400nm范围内仅在285nm处测得一很小的吸收峰。


在做紫外扫描时，样品溶剂不同，测得的样品的最大吸收波长也会不同。如果用HPLC-UV检测该化合物，波长选为202nm（以乙醇作为溶剂测得的），是否合适呢？在做HPLC检测时，样品的溶剂如果不是流动相之一，会不会影响检测结果呢？
C=O在270～300nm有较弱的紫外吸收（ε=10～100），285nm的峰应为C=O的吸收。乙腈-水的极性强于乙醇，由于N-π跃迁的存在，将发生蓝移（最大吸收202变为197），在紫外区的边缘测定有关物质则干扰甚大，不合适；测定含量勉强可以，如果仅测定含量可以根据吸收情况适当增加到210nm左右。如果溶剂跟流动相一样，那紫外吸收也应该一致，否则样品就非完全同一物质。紫外测定选择最大吸收波长进行含量测定，可以提高检测灵敏度，减少其他干扰，但这是相对的。

本文转自实验与分析