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液相色谱（LC）
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主题：【求助】HPLC 出峰时间延迟

浏览0 回复13 电梯直达
wang45695
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发表于：2016/01/06 21:40:34 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
在用HPLC测定人血白蛋白含量时，用TSKG３０００　SWｘｌ　色谱柱，新柱子小分子药物在６０分钟左右出峰，柱子用久了却延迟到８０分钟（运行时间８０ｍｉｎ），会残留到下一针，请问除了换新柱子外还有别的什么方法能让小分子药物在运行时间结束前出峰？
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夏天的雪
bingwang228
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2016/1/6 22:27:17 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
什么流动相，能否考虑梯度条件
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abzh99312
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2016/1/6 23:33:58 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
为什么不考虑维护保养一下柱子呢，可以尝试低流速下返冲柱子过夜（如果柱子标明不可返冲则放弃，如果有保护柱则只冲洗保护柱），然后正接用常用流动相2~5倍浓度常速下冲洗2~3个常规测试时间。
不行就用楼上的方式，梯度洗脱，以加快后面的出峰。
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一片枫叶
v2960432
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2016/1/7 7:12:39 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
增加洗脱液的浓度哦可否？
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wang45695
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2016/1/7 8:07:17 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 夏天的雪(bingwang228) 发表:
什么流动相，能否考虑梯度条件
流动相是

0.1M磷酸氢二钾溶液（PH７.０）
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wang45695
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2016/1/7 8:08:50 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 abzh99312(abzh99312) 发表:
为什么不考虑维护保养一下柱子呢，可以尝试低流速下返冲柱子过夜（如果柱子标明不可返冲则放弃，如果有保护柱则只冲洗保护柱），然后正接用常用流动相2~5倍浓度常速下冲洗2~3个常规测试时间。
不行就用楼上的方式，梯度洗脱，以加快后面的出峰。
谢谢回答！
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夏天的雪
bingwang228
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2016/1/7 18:31:53 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 wang45695(wang45695) 发表:
流动相是

0.1M磷酸氢二钾溶液（PH７.０）
细看了楼主的两张色谱图，前面物质的出峰时间保留时间变化不大，主峰的响应变化也不大，柱子应该还可以的。可以等待测物质出来后适当改变流动相，让杂峰提前出峰，然后再用流动相平衡色谱柱
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wang45695
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2016/1/8 9:03:05 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 夏天的雪(bingwang228) 发表:
细看了楼主的两张色谱图，前面物质的出峰时间保留时间变化不大，主峰的响应变化也不大，柱子应该还可以的。可以等待测物质出来后适当改变流动相，让杂峰提前出峰，然后再用流动相平衡色谱柱
谢谢！
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武灵
zhonghuashendun
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2016/1/8 13:06:21 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
尝试等度程序走的时间再长一点，看看情况。
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Peterwills
Peterwills
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2016/1/8 14:56:39 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
在不改变方法的基础上，可以尝试调节一下PH 值，这个对蛋白出峰位置有影响
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wang45695
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2016/1/8 15:00:26 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 Peterwills(Peterwills) 发表:
在不改变方法的基础上，可以尝试调节一下PH 值，这个对蛋白出峰位置有影响
谢谢！
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