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凝胶色谱（GPC）

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主题：【讨论】新手咨询凝胶渗透色谱流动相问题

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礼安

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发表于：2016/01/31 17:58:44 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

各位版友，小弟最近在做凝胶色谱时遇到几个问题，请大家帮忙指导下，感激不尽。
具体问题：在采用RID+3根凝胶柱（THF用）测定游离酸样品时，发现若采用纯的THF作流动相，浓度-响应不成线性，如：样品浓度5mg/ml时，峰高25mv左右，稀释一定倍数之后基本不成峰形，且不成线性（峰成台阶型）。然后向流动相中加入0.05%冰乙酸后，峰形改善的同时线性能做到0.999，但是主峰与附近峰分离度减小无法分离。请教有木有其他办法或者添加其他试剂改善浓度-响应不成比例的问题呢？或者说四氢呋喃系统一般能加什么试剂改善峰形及响应？谢谢~

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2016/2/17 16:01:23 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

首先是column的选型，其次是样品分子量与浓度对应关系有要求的

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小不董

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2016/2/23 8:13:02 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

至少你有两个问题，第一，5mg/ml浓度可能有点大了，有可能团聚，你可以比较下更低浓度的出峰时间，若出峰时间比低浓度的早，基本可以证实这点。
第二，由于你说了样品是酸性的，所以流动相需要调节pH值，你的实验已经证明，至于加多少浓度，这需要你去摸索，找到合适的盐浓度。
另你说的线性达到0.999是什么意思？什么和什么的线性关系？

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礼安

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2016/2/23 9:42:18 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 ntysg(ntysg) 发表:
首先是column的选型，其次是样品分子量与浓度对应关系有要求的

目前手头买了赛分和waters的色谱柱，浓度直接参考的EP暂时还未进行考察。

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2016/2/23 9:46:18 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 小不董(doxw0323) 发表:
至少你有两个问题，第一，5mg/ml浓度可能有点大了，有可能团聚，你可以比较下更低浓度的出峰时间，若出峰时间比低浓度的早，基本可以证实这点。
第二，由于你说了样品是酸性的，所以流动相需要调节pH值，你的实验已经证明，至于加多少浓度，这需要你去摸索，找到合适的盐浓度。
另你说的线性达到0.999是什么意思？什么和什么的线性关系？

目前样品浓度参照的EP，下一步先证实下这个问题；就是加酸的这个问题比较困扰，改善峰行使主峰保留时间前移。这里的线性是指加了酸之后做线性的话相关系数能做到3个9，如果不加酸做不起线性哦。

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