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主题：【讨论】多聚核苷酸的分子量和分子量分布的检测方法的建立

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whizz
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发表于：2012/01/17 14:23:31 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
本人最近准备做“一种多聚核苷酸的分子量和分子量分布的检测方法”的建立研究工作，由于本人在此方面没有经验，希望大家帮帮小弟。分子量主要分布在20000-240000（30-400bp）
（1）凝胶色谱柱的如何选择？
（2）标准物质（DNA marker）的选择
（3）紫外检测器和示差检测器是否均可使用？
（4）流动相如何选择？
（5）凝胶色谱仪型号的选购？
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2012/1/17 16:33:38 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
根据你要检测的物质选择色谱柱如：水性或者有机，一根色谱柱应该够用。标准品有相近的最好，如没有聚苯乙烯就可以。紫外检测器不能使用。流动相甲醇乙腈什么的。
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2012/1/19 9:39:23 Last edit by emoc98311
小不董
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2012/1/18 12:50:38 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 whizz(whizz) 发表:
本人最近准备做“一种多聚核苷酸的分子量和分子量分布的检测方法”的建立研究工作，由于本人在此方面没有经验，希望大家帮帮小弟。分子量主要分布在20000-240000（30-400bp）
（1）凝胶色谱柱的如何选择？根据流动相，选择水相或者有机相，再根据分子量范围选择不同规格的柱子和不同的牌子。
（2）标准物质（DNA marker）的选择， 选择比较相近的高分子标准物质，如果是水相，一般选择PEG/PEO，有机相选择PS和PMMA比较多。
（3）紫外检测器和示差检测器是否均可使用？ 检测器的选择是看你的目标物用什么检测器能检测到，什么检测灵敏高就用什么。同时要考虑标准物的检测。
（4）流动相如何选择？ 首先选择，由于你做的物质是多聚核苷酸，属于生物大分子物质，分脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)两大类。要考虑其溶解分散及保证其稳定性。你做这方面研究的， 应该对其性质比我们更熟悉，需要什么水相？加什么缓冲盐。
（5）凝胶色谱仪型号的选购？
这个要考虑你的预算，预算多就可以考虑不同的配置了，或者不同品牌了，由于你主要做多聚核苷酸，不需要用高温，就用常温的GPC就可以了，不测定绝对分子也就不用激光光散射检测器了，但是如果考虑检测物的特殊性可以考虑多检测器。
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