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主题：【求助】疏水层析柱在液相上条件优化

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tdwinner
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发表于：2016/03/15 21:06:06 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
大家好
请教个条件优化的问题，在液相上走疏水柱走抗体偶联药物，（8个不同等电点的蛋白峰），bufferA是高盐硫酸铵，bufferB是低盐，五个峰一直分不开，而且是峰不高，但走峰时间较长。尝试优化了bufferB的梯度，或者改变buffer的1pH值，都不行。大家有经验的有什么好的建议？谢谢啦。
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2016/3/16 10:37:41 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊

把色谱条件说清楚一下，包括色谱柱型号、填料，流动相组成，检测器等。
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tdwinner
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2016/3/16 17:09:29 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
流动相是 bufferA： 50mM 磷酸盐，1.5M硫酸铵，5%体积比异丙醇，pH7.0
              bufferB:  50mM磷酸盐 ， 20%体积比异丙醇，pH7.0
柱子是 7.5?75mm, Ethe-5PW column (Tosoh Bioscience)
检测器是DAD检测器，波长280nm
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2016/3/16 17:10:10 Last edit by tdwinner
有水有渝
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2016/3/17 8:51:22 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这个是标准方法吗，这么复杂的没有做过，首先色谱柱的孔径选择与分子量大小是否相适应，另外不同等电点在PH7.0下分别是什么状态，在这个条件下是否都稳定。

根据等电点进行梯度PH变化是否可行？
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2016/3/18 9:48:40 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
谢谢回复
不过疏水柱应该不用考虑孔径吧， 抗体应该偏酸性，这样在pH7下都应该为负电，在高盐下应该都稳定
梯度pH应该是等电聚焦毛细管的方法
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