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主题：【讨论】小肽的子离子比母离子还大？为什么？

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发表于：2016/07/07 23:13:23 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
有一篇文献用MRM 方法测定CYP3A4， 肽段是LSLGGLLQPEKPVVLK。文献上选择母离子 m/z=564.6, 子离子m/z=746。
为什么母离子比子离子还大？
难道是母离子电荷比子离子多？


原文链接：http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0006295214005838
原文方法如下：
The CYP protein quantification assays were performed on a triple-quadrupole $$lc-MS instrument (Agilent 6460A) coupled to an Agilent 1290 Infinity $$lc system (Agilent Technologies), in ESI positive ionization mode. Approximately 2 μg of the trypsin digest (5 μl) was injected onto the column (Kinetex 1.7 μ, C18 100A; 100 × 2.1 mm, Phenomenex, Torrance, CA). Mobile phases consisted of water (A) and acetonitrile (B) (both containing 0.1% formic acid) at a flow rate of 0.3 ml/min. The gradient was 3% mobile phase B for 2.0 min, followed by gradient elution program with mobile phase B concentration of 3 to 18% (2.0-4.0 min), 18 to 22% (4.0-8.0 min), 22 to 24% (8.0-10 min), 24% (10-12.2 min), 24 to 34% (12.2-12.5 min) and 34 to 38% (12.5-15.0 min). This was followed by washing with 80% mobile phase B for 0.9 min and re-equilibration for 4.9 min. Surrogate peptides and internal standards were monitored in multiple reaction monitoring (MRM) mode using instrument parameters provided in Table 1. HP$$lc-MS/MS data were processed using the MassHunter (Agilent Technologies) and Skyline software.

Table 1.

Optimized MS/MS parameters used for quantification of surrogate peptides and internal standards of CYP enzymes in trypsin digested microsomes.
EnzymePeptidePrecursor ion (m/z)Product ion (m/z)Fragmentor (V)Collision energy (eV)LLOQ (fmol on-column)
CYP3A4LSLGGLLQPEKPVVLK564.674610090.3
  564.6689.410010 
 LSLGGLLQPEKPVVLK567.37501009 
  567.3693.41009 
CYP3A5DSIDPYIYTPFGTGPR900.0995.7130281
  900.0684.913020 
 DSIDPYIYTPFGTGPR904.91005.513028 
  904.9689.913028 
CYP3A7FNPLDPFVLSIK695.4918.4110160.1
  695.4564.711016 
 FNPLDPFVLSIK699.4926.511016 
  699.4568.811016 
CYP2C9GIFPLAER451.9585.47570.15
  451.9366.8757 
 GIFPLAER456.8595.3757 
  456.8371.7757 
CYP2C19IYGPVFTLYFGLER838.01145.4145281
  838.0998.314528 
 IYGPVFTLYFGLER843.01155.614528 
  843.01008.514528 
CYP2A6GTGGANIDPTFFLSR777.1982.5130220.4
  777.1867.213026 
 GTGGANIDPTFFLSR781.9992.513026 
  781.9877.513026 
CYP2D6GTTLITNLSSVLK673.9974.4110160.6
  673.9861.311016 
 GTTLITNLSSVLK677.9982.411016 
  677.9869.311016 
CYP reductaseFAVFGLGNK476.9734.310090.05
  476.9635.31009 
 FAVFGLGNK480.8742.41009 
  480.8643.41009 

Underlined residues represent the internal standards with the labeled [13C615N2]-lysine or [13C615N4]-arginine.
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shmyd03
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2016/7/20 10:24:03 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
LSLGGLLQPEKPVVLK


MW(Av.) = 1691.0874  M3H+ 564.7031
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2017/6/23 6:12:07 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
带电荷不一样。。。
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