原文由 栀子花开(qzxmsy) 发表:
1.用什么规格的离心管应该不用问,因为4.3.6明确告知:离心管 50mL。
2.关心离心参数的问题,用转速其实是不严谨的,因为这个指标无法准确描述离心效果。一般情况下转速可以与标准要求的有所偏离,在分离时一般采用较高的转速,具体多少可视样品种类、离心机可承受范围、离心管可承受范围等因素而定,一般可采用8000r/min~10000/min。
3.标准中已明确是将上层固体吸净弃去,在下层溶液中加入正已烷,也就是说还是在原来的那支离心管中。
4.试样溶液体积在4.4.3中已经说得比较清楚了,“收集洗脱液作为试样溶液”。你说的“流动相洗脱的那个1ml”不是很准确,洗脱液1mL并不代表洗脱后也是1mL,要准确计算试样溶液体积,还是需要洗脱时用刻度离心管接试样溶液,从刻度离心管中读取体积数,这个数才是真正的试样溶液体积。
说句题外话,有些时候洗脱液体积不一定是1mL,可以作适当调整。
1、为什么挑出50ml离心管说。是应为样品量很少,离心的时候上清液很浅,转移出来的“上清液”依旧很浑。感觉用小点的离心管分层会不会更好?
2、没有异议
3、这里具体情况是:加入正己烷离心后分成三层,中间有一蛋黄层(厚薄不一,可能跟蛋的品种品质有关),而且很容易被吸管吸破,并不是标准上所说的絮状物。几乎无法在不吸取到下层溶液的情况下把上中两层吸走。如果按照标准做,平行和回收完全没法控制。我尝试重复加正己烷震荡再离心,效果并不明显。
假如我直接吸取下层溶液转移到新的离心管内,这又意味多个容器而损失增大。(我好像有点想法了,这需要验证)
4、没有异议
我的猜测:1和3两个问题是有关联的。当1问题中的上清液真的很“清”,那就不会有3中鸡蛋层而是标准的“絮状”。
因为以前没做过,所以发上来问问各位老师看看,也许有做过这个标准的来说下经验。