维权声明:本文为konglong原创作品,本作者与仪器信息网是该作品合法使用者,该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现均属侵权违法行为,我们将追究法律责任。
液相色谱常规分析中,面积归一化法是经常用到的,往往采用这个方法来确定样品的含量。但是由于操作细节的不同,有时不同人做出来会出现很大的差异,即使用相同的方法,下面就是一个具体的实例。
样品名称:2- 氯-5-三氟甲基吡啶
我们根据我们的习惯和特点,很快分析完这个样品,结果表明样品纯度很高,含量为99.2%(图1),不过在测定前客户要求我们时间放到20分钟,但没仔细体会其含义。等测定结果出来后,客户对我们说,与工厂的测定结果不符,别人是92.2%,为什么差距这么大。这个差距当然很大了,不过由于不同人做,采用条件不同,有时的确有这么大的差异,我仔细审查了学生做的结果,认为我们的结论是真确的,因为我们用DAD比较了不同波长下的结果的差异,并没有这么明显。为了弄清原因,要求客户提供色谱图和色谱条件,但工厂开始只给了色谱图(图2),并没有具体的色谱条件,色谱条件一般作为技术保密,不容易公开。
比较这2个图,大家发现了什么,我们是采用戴安的U3000,用原装软件记录。而厂家的记录软件是最常见的国产数据工作站 N2000。仔细比较这二个图,如果细心就会发现,工厂用N2000记录的色谱图是平头峰,而我们仍保持尖峰。问题就出在这里,当样品信号超过仪器记录时,出现平头峰,使得主峰实际记录面积变小,而杂质峰面积变大。N2000的最大记录为1000mV,而一般进口软件在3000mV以上才会超载。工厂的分析者,按照某一方法,不考虑记录软件的差异,结果使得检测信号非常高,这是一方面。从另一方面我们选择的是另一个最大检测波长265nm,而不是工厂的选择的最大波长215nm,在215nm样品峰更高,更会超载。
在这里,不同色谱柱的差异,以及流动性相一般情况下的差异,不会造成不同检测者测定结果的差异太大。检测波长的选择是一个重要的方面,不同的波长有时差别很大,215nm和265nm条件下,杂质的含量差异是比较大的,但对主峰的相对面积影响不大。不过很多人对样品信号的超载往往会忽视,尤其有些人对不同仪器软件的差异不熟,一味地照搬照抄。给用户造成了很大的困惑。具体操作者应根据不同的仪器状况作出方法的具体调整。
因此,如果不同人对同一样品做出来结果差异很大,不一定说明某人正确,某人不正确。需要比较很多因素,分析判断,才能得出相对合理的结论。当然,这种面积归一化法的结论事相对的,不是绝对的。
面积归一化法的可靠性是相对的,但在合理的条件下,这种可靠性又是可信的,需要分析者自己去把握。