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液质联用（LCMS）

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主题：MRM峰型拖尾，如何改善峰型

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syzhudi

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发表于：2016/12/04 17:34:52 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

悬赏金额：10积分状态：已解决

我要检测的一个化合物带有很多个酚羟基。HPLC检测时，流动相的ACN和水中都加了0.2%的乙酸或者直接加0.2%的磷酸来控制峰型，结果还可以。上UP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp]LC-MS后，用的是乙腈:0.1% 甲酸的流动相，常规的梯度洗脱。5cm x 1.7um的小柱子。ESI- 响应良好。唯一的问题是拖尾，见下图。已经将流速提到0.6ml/min了，但是用于定量仍然不理想。曾经提高过甲酸的浓度，但是对响应影响较大，甚至-ESI没有响应了，如何在响应和峰型上做出选择，真的很头疼。ESI+的响应不好。

该帖子作者被版主 20071940xu加 2积分， 2经验，加分理由：鼓励发帖

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2016/12/5 8:53:57 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

可以改变一下流动相的梯度试试。

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2016/12/5 8:56:03 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

流动相梯度是多少呢，建议调整下梯度

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weiqing1983

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2016/12/5 8:57:18 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

也可以在流动相里面加点缓冲盐比如5mM乙酸铵等，负模式可以在样品最后复溶时加点氨水，帮助其离子化，效果会好一点。

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amugong

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2016/12/5 15:38:40 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

建议用乙酸铵，另酚羟基很多，极性很大，柱子换成HILIC柱增加保留

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syzhudi

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2016/12/5 19:55:15 地板管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 20071940xu(20071940xu) 发表:
流动相梯度是多少呢，建议调整下梯度

0.3min 10%ACN; 2.5min 95% ACN; 4.5min 95%ACN; 4.7min 10%ACN; 6min 10%ACN。目标化合物极性偏小，C18柱保留时间比较长，试了几个梯度，这个梯度算是出峰比较快的了，但是仍然不太好，没有在有效洗脱段出来，只能调到高有机相段了。您看看这个怎么调整呢？

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2016/12/5 19:56:22 6楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 weiqing1983(weiqing1983) 发表:
可以改变一下流动相的梯度试试。

0.3min 10%ACN; 2.5min 95% ACN; 4.5min 95%ACN; 4.7min 10%ACN; 6min 10%ACN。试了几个梯度，这个梯度算是出峰比较快的了，但是仍然不太好，没有在有效洗脱段出来，只能调到高有机相段了。您看看这个怎么调整呢？

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2016/12/5 21:16:30 7楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 amugong(amugong) 发表:
建议用乙酸铵，另酚羟基很多，极性很大，柱子换成HILIC柱增加保留

我这个化合物结构比较复杂，C18柱保留时间很长。HILIC柱我估计要更靠后，再摸索摸索吧。乙酸铵以前我在+ESI模式下用过，是为了给一个很难离子化的化合物挂个NH4+。我是搞生物的，对于化合物检测真的是个门外汉，还要多向你们学习学习。

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东海710

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2016/12/6 13:01:16 8楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

这个物质极性较小，建议增加有机相比例，此外，换柱子再试试；

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amugong

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2016/12/6 17:04:34 9楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 syzhudi(v2952102) 发表:
我这个化合物结构比较复杂，C18柱保留时间很长。HILIC柱我估计要更靠后，再摸索摸索吧。乙酸铵以前我在+ESI模式下用过，是为了给一个很难离子化的化合物挂个NH4+。我是搞生物的，对于化合物检测真的是个门外汉，还要多向你们学习学习。

羟基多，极性大，C18柱一般要加酸会使峰形和保留都有改善，但[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp]液质的负源加酸响应会变低，加乙酸铵也会使峰形变好，hilic出峰如果慢，水相比例加大即可，浓度到10-20mm试一下。

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syzhudi

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2016/12/9 12:58:15 10楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 东海710(v2945599) 发表:
这个物质极性较小，建议增加有机相比例，此外，换柱子再试试；

增加有机相比例是有效果的。我把95%的高有机相改到100%，流速加大。得到了下面的图，明显改善了拖尾。但是又有了新问题，这个梯度洗不干净柱子上的目标化合物，影响定量。我这个化合物是个柱前衍生得到的产物。没有标准品，文献里也没有具体说明，实验结果应该显示极性比较小的，我试了下很多有机试剂都能溶蒸干的固体，但是溶解性最好的是DMSO和丙酮，异丙醇或者极性再小点的乙醚，己烷都溶不好，甲醇比乙腈溶解性稍微好一点。我现在用的是ACN的流动相，换成甲醇响应会高5倍左右，但是峰型很差，同样洗不干净。。进样针已经设置成进样前后各用纯甲醇洗10s，空白样品仍然有较高的残留。我判断应该是色谱柱残留。我想问下对于这种亲脂性，弱酸性的物质（带两个苯环），有更合适的色谱柱来分离吗？