原文由 vanorazhao(v2946960) 发表:
想问一下,在用内标法做标曲的时候,一种是先配好目标标准品个浓度梯度的标液,再加入内标,用外标峰面积与内标峰面积的比为纵坐标,以外标的浓度为横坐标做标准曲线?另一种是将内标和外标配成混合母液,再逐级稀释成标线所需浓度,这种方式的标曲怎么做呢?要是再按照外标峰面积与内标峰面积的比来做标曲的话理论上就成了一条y=1的直线了(尴尬ing~~~),再有(百度上对于内标法的解释,不太理解),按照校正因子计算的话,是不是只要有一个点的内标和外标的混合标液就可以做全部的定量了?ps:据我的理解,校正因子有一个就可以定量了,要是待测物的浓度变化范围很大,这样会不会很不准确呢?
关于内标法,一直没太搞明白,麻烦解答一下,谢谢
内标法做标准曲线,你加入的内标是准确的,一定的,否则会对计算引入新的误差。方法应该是在梯度标准溶液中加入等量内标液,然后定容(内标液浓度知不知道都无所谓,但要保证加入量一致,比如说,用移液管精密量取1ml加入)。
内标法的主要目的,是消除进样误差。假设你的进样量是10ul,待测物峰面积为A标,内标峰面积为A内,如果进样系统(特别是以前手动进样的GC/HPLC)存在误差,A标和A内的偏差会比较大(实际进样量可能是9.9ul、10.1ul等),但是A标/A内两者比值理论上不变。现在的仪器,普遍使用自动进样器,对进样量的控制比以前好得多,所以外标法基本也能满足要求。在这种情况下,可以不使用内标法进行测定。