主题：【分享】傅若农：扭转乾坤—神奇的反应顶空气相色谱分析

编者注：傅若农教授生于1930年，1953年毕业于北京大学化学系，而后一直在北京理工大学(原北京工业学院)从事教学与科研工作。1958年，傅若农教授开始带领学生初步进入吸附柱色谱和气相色谱的探索;1966到1976年文化大革命的后期，傅若农教授在干校劳动的间隙，系统地阅读并翻译了两本气相色谱启蒙书，从此进入其后半生一直从事的事业——色谱研究。傅若农教授是我国老一辈色谱研究专家，见证了我国气相色谱研究的发展，为我国培养了众多色谱研究人才。
第一讲：傅若农讲述[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱技术发展历史及趋势[/url]
第二讲：傅若农：从三家公司GC产品更迭看[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相技术发展[/url]
第三讲：傅若农：从国产[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相产品看国内气相发展脉络及现状[/url]
第四讲：傅若农：[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱固定液的前世今生[/url]
第五讲：傅若农：气-固色谱的魅力
第六讲：傅若农：PLOT[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱柱的诱惑力[/url]
第七讲：傅若农：酒驾判官—顶空[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱的前世今生[/url]
第八讲：傅若农：一扫而光——吹扫捕集-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱的发展[/url]
第九讲：傅若农：凌空一瞥洞察一切——神通广大的固相微萃取（SPME）
第十讲：傅若农：悬“珠”济世——单液滴微萃取(SDME)的妙用
    我们在前面讨论了四讲和顶空分析有关的色谱分析方法，它们都是针对挥发和半挥发性物质的，也就是说难挥发和不挥发性物质是不可以用这些方法分析的。但是化学是一种很神奇的东西，可以扭转乾坤，本来不可为，但是用化学的力量可以变成可为。反应顶空分析就是可以把难挥发和不会发性物质进行顶空分析。
　　反应顶空分析是反应气相色谱的一个分支，另外两个大的分支是裂解气相色谱和衍生化气相色谱，反应气相色谱就是不可能进行气相色谱的对象经过化学反应，使被分析物转化为有挥发性的物质，从而可以用气相色谱进行分析它们。
　　2001年华南理工大学的柴欣生教授在美国亚特兰大佐治亚理工大学造纸科学技术研究院任职期间和朱俊勇教授等最先提出了反应顶空分析的概念 。之后2003年Guzowski等 也把相转化反应技术应用于顶空气相色谱，用以测定化学试剂中的羟胺。通过在醋酸钠缓冲溶液中与FeCl3反应,羟胺在单步反应中可以转变成氧化亚氮(N2O) ,产物气体N2O用电子捕获检测测进行测定。大家知道氧化亚氮(笑气)是比较稳定的化合物，用气相色谱测定很容易。
　　在之后的十几年里，柴欣生教授在结合制浆造纸、生物质、高分子合成等学科的研究中开发出许多用顶空气相色谱分析不挥发样品的新方法，开通了可以使用顶空气相色谱分析不挥发和难挥发化合物的道路。
反应顶空气相色谱的应用
1. 测定造纸厂黑液中的碳酸盐含量
　　碳酸盐和酸作用生成二氧化碳，用顶空气相色谱测定CO2含量估算样品中的碳酸盐量，用纯碳酸钠标准溶液进行仪器的标定(J. Chromatogr. A,2001, 909:249-257)，测定方法如下：
　　把一个21.6 ml的样品瓶配以有隔垫的瓶盖，用130 ml/s流速的氮气吹扫此样品瓶2 min，以排除样品瓶空气中的CO2气，然后加入0.5 ml 2mol/L 的硫酸溶液，用注射器加入10-1000 ml样品溶液，把样品瓶置于自动进样器上，进行顶空分析。许多工业液体如浓缩的黑液，白液，和绿液可以直接进样，无需预处理。而固体样品必须先溶解成溶液之后进行分析。
(1) 温度的影响
　　二氧化碳于20℃下在水中的溶解度为(体积比)1:0.878，而在25℃下在水中的溶解度为(体积比)1:0.759，所以提高温度可以减少它在水中的溶解度，把它从水溶液中释放出来，从而提高测定的灵敏度，在本研究中使用60℃，同时溶液有过量的酸保证可以把CO2气体全部释放出来。不过不能是使用太高浓度的酸以防腐蚀仪器。
(2) 检测器线性和恒定的凝固相释放气体速率
　　这一方法的基础是在给定实验条件下从凝固相中释放出气体的速率时恒定的，大家知道热导池检测CO2在空气中浓度变化的范围，是在热导池的线性范围之内，可以用检测器的线性来考察从凝固相中释放CO2气体的速率是否恒定。用碳酸钠溶液作标准样进行试验，实验证明碳酸钠的浓度可以达100 μmol。实验证明从碳酸钠转化为CO2气体的速率是恒定的。
(3) 顶空气体稀释变化对分析准确度的影响
　　用碳酸钠标准溶液加入量的变化测试顶空气体稀释变化对分析准确度的影响，顶空气体稀释度的变化，可以通过两种反应物的起始样品量的变化，来改变反应瓶中反应后的顶空体积(。作者进行了两组实验，用固定体积的硫酸(反应物R)溶液(VR=0.5 ml)与碳酸钠标准溶液反应。第一组实验使用9个碳酸钠标准溶液含有同样数量的碳酸钠1.06μg，但是他们的体积不同，从Vs=100μL 到350μL，同样数量碳酸钠反应后近似的顶空体积等于,由于样品体积变化带来的顶空稀释度的影响可以用GC信号的变化来计算，对使用21.6 ml样品瓶来说，当样品体积从100μL到1100μL ，GC信号的变化不超过5%。使用的商品自动进样器是恒压近样，可以抵消一部分样品体积变化带来的影响。测定出的相对标准偏差只有1.3%，可以忽略不计，见表1.
　　表 1 样品体积变对准确度的影响

(1) 空气中二氧化碳的影响
　　空气中含有二氧化碳，会对结果又影响，在标准空气中二氧化碳的量约为15μmol/L,在21.6mL样品瓶中含有约0.3μmol二氧化碳，这一量高于检测灵敏度0.1μmol，这样对低浓度样品就会有影响。为了提高测定准确度需要把顶空瓶中的二氧化碳排除，在加入反映了物之前用用一只23号注射针以氮气彻底吹扫顶空瓶，降低二氧化碳的浓度，结果说明氮气以130mL/min的速度吹扫2min就可以使二氧化碳降低到检测不出来的程度。
(2) 测定精度
　　作者测定了碳酸钠标准和造纸厂黑液中二氧化碳的浓度，把100μL 0.1mol 的碳酸钠标准溶液分析5次，100μL造纸厂黑液也分析5次，其结果见表2，标准偏差分别为0.62%和3.74%。

　　表 2 测定了碳酸钠标准和造纸厂黑液中二氧化碳的精度

   

2 用顶空气相色谱测定样品中少量酸和碱的方法
　　柴欣生等使用顶空气相色谱测定少量含酸和含碱样品，这次是与前面的方法相反，使用标准的碳酸氢钠溶液和酸性盐反应产生二氧化碳，用气相色谱的热导检测器测定二氧化碳的含量。
(1) 测定使用的仪器和条件
　　所有的测定都使用HP-7694自动进样器和HP-6890毛细管气相色谱仪，用热导检测器进行检测。
　　色谱条件：
　　色谱柱：大内径涂渍二乙烯基苯聚合物的PLOT柱(GS-Q PLOT柱)
　　柱温：60℃
　　载气：He 3.1 mL/min
　　样品瓶用He加压0.2 min，
　　样品环注入样品0.2 min
　　样品环平衡 0.05 min
　　样品瓶装液体样品平衡2 min
　　样品瓶装固体样品平衡 10 min
(2)样品分析步骤
　　(a)分析样品中的碱：取一定量的样品(液体或固体)加入一定体积的0.100 mol/L的盐酸标准溶液中，把样品中的碱中和掉，还有多余的盐酸标准溶液，用注射器取一定量的此溶液，注入含有4mL标准碳酸氢钠溶液的顶空样品瓶中，进行顶空GC分析。
　　(b)分析样品中的酸：用注射器取一定量的被测溶液，直接注入含有4mL标准碳酸氢钠溶液的顶空样品瓶中，进行顶空GC分析。
　　(3)分析条件的影响
　　(a)温度：60℃时二氧化碳的无因次分配系数大于1000，几乎全部从溶液中释放出来，所以能够用测定二氧化碳进行定量分析样品中的酸或碱。但是在高温下碳酸氢钠会分解。但是碳酸氢钠分解放出二氧化碳也是一个平衡反应，碳酸氢钠分解出来的蒸汽相和液相之间完全平衡，在一个给定的样品瓶密闭空间中需要约8 min，约有10%的碳酸氢钠分解为二氧化碳，所以这样会影响样品测定的准确度，特别是测定的酸含量较低时更为显著。分解与碳酸氢钠的浓度有直接关系，根据实验研究在一个密闭空间、短时间内分解出来的二氧化碳来的二氧化碳量远小于样品分解出来的二氧化碳的量，如图 1所示，在60℃时短时间内分解量很小。

    图 1 碳酸氢钠分解出CO2随时间的变化

　　(b)空气中二氧化碳的影响
　　在本实验中采用进行空白试验的方法，通过校准抵消空气中二氧化碳的影响。
　　(c)液体样品的体积
　　一般来讲，往顶空样品瓶中加入较多的样品量，可以提高测定灵敏度，但同时需要过量的碳酸氢钠，使用现行的商品自动进样器，改变顶空体积就会就会影响检测结果，所以避免大幅度改变顶空的体积，例如在一个20mL的顶空瓶含有4mL碳酸氢钠溶液，使用的样品量为200μL，这样会使用顶空体积改变1.25%，对测量结果没有多大影响。对固体样品可以用制备成的溶液量来调节。
(3)这一方法的准确度和精密度
　　使用现有的商品仪器进行反应顶空气相色谱的精密度和准确度与经典方法进行了对比，如表3和表4所示。

表3 测定酸与滴定法的比较

样品	盐酸/（mol/L）		相对偏差/%
	本方法	滴定法
1号溶液	0.1002	0.1000	0.2
2号溶液	0.0498	0.0500	-0.3
3号溶液	0.0247	0.0250	-1.2
4号溶液	0.0101	0.0100	1.0

表4 测定碳酸钠与电导法的比较

样品	碳酸钠/%		相对偏差/%
	本方法	电导法
1号黑液	4.9	4.7	4.3
2号黑液	23.2	24.1	-3.7
3号黑液	25.1	24.5	2.4
4号黑液	42.0	42.8	-1.9

3 用反应顶空气相色谱测定木纤维中羧基
　　在纤维材料中含有的羧基(COOHs)代表它的离子交换能力，即在加工过程中吸收金属阳离子的能力，它影响木纤维的膨胀和均匀性，从而有助于纤维的结合，有利于造纸助留剂的吸附，纸的电性能决定于木纤维中羧酸基团结合金属离子的数量。另一方面，被羧酸基团吸着的阳离子对纤维和纸张干燥时的变色机制有影响。这些羧酸基团对木纤维的改性起着重要作用，因为有很强的反应能力，对加成和取代反应至关重要，最后这些羧酸基团可以增加专用级别溶解木浆的粘度并降低纤维的溶解度。
　　所以对木纤维羧基含量的测定无论是基础研究还是应用研究都是至关重要的。柴欣生等开发了用反应顶空气相色谱分析木纤维中的羧基含量,关键问题是优化分析条件，把羧基完全转化为气相色谱可以检测的挥发性物质，以提高测定的准确性。
(1) 测定原理
　　木纤维上的羧基与碳酸氢钠反应，可以释放出二氧化碳，用气相色谱热导检测器进行检测分析，反应如下：

(2) 测定使用的仪器和条件
　　所有的测定都使用HP-7694自动进样器和HP-6890毛细管气相色谱仪，用热导检测器进行检测。
　　色谱条件：
　　色谱柱：大内径涂渍二乙烯基苯聚合物的PLOT柱(GS-Q PLOT柱30m x 0.53mm )
　　柱温：60℃
　　载气：He 3.1 mL/min,使用不分流模式
　　样品瓶用He加压0.2 min，
　　样品环注入样品0.2 min
　　样品环平衡 0.05 min
　　样品瓶装液体样品平衡2 min
　　样品瓶装固体样品平衡 10 min
　　样品瓶如图2所示：

图 2 反应顶空气相色谱测定木纤维中羧基的样品瓶

(3)测定步骤
　　首先在室温下把纤维样品用0.100mol/L盐酸溶液处理1h，以匀速用磁搅拌器进行搅拌，烘干的纤维在酸溶液中的浓度为1.2%，然后把纤维样品在一个离心果汁萃取器中脱水浓缩，确定脱水纤维的浓度，这样就确定了纤维中残留盐酸的量。
　　取4mL 0.005mol/L标准碳酸氢钠和0.1mol/L NaCl的混合溶液，注入顶空测试瓶中，取一支长 2.54 cm 的针，穿过顶空瓶隔垫(如图2)，称量0.15g脱水纤维置于隔垫里面的针上，样品不要和瓶中的溶液接触反应，把顶空瓶的隔垫盖紧，把针拔出，纤维样品就落入反应溶液中。
(4)这一方法的准确和精密度
　　表4列出用反应顶空气相色谱分析木纤维中羧基的比较结果

表4 顶空气相色谱分析木纤维中羧基的比较结果

样品	纤维中羧基含量/（mmol/g）		相对偏差/%
	本方法	滴定法
1号样品	0.0789	0.0786	0.35
2号样品	0.0682	0.0739	-7.11
3号样品	0.0413	0.0415	-0.57
4号样品	0.0695	0.0694	0.04
5号样品	0.0815	0.0755	8.01
6号样品	0.0611	0.0610	0.10
7号样品	0.0225	0.0241	-6.87
8号样品	0.0577	0.0581	-0.69

(1) 方法的进一步改进
　　两年后柴欣生教授的研究组又进一步把方法加以改进，把样品制备(即样品酸化之后把样品进行水洗)，反应试剂的浓度(即降低碳酸氢钠的浓度，减少它的分解)，和样品加入方式(即直接加入样品)进行改进。新方法更为简洁、可靠、更为实用，可以用于非纤维状的样品。
　　(a)修改后的方法：取烘干后的纸浆样品0.2g 置于装有200mL 0.1mol/L盐酸溶液的烧杯中，在室温下用电磁搅拌混合 1 h，之后把纸浆样品用去离子水彻底清洗，除去残留的盐酸，测定洗涤水的pH值以确定是否清洗彻底，把清洗后的纸浆样品放在恒温恒湿的环境下进行空气干燥。根据纸浆含有羧基的量用分析天平称取0.03-0.08 g样品置于顶空样品瓶中，加入4 mL碳酸氢钠溶液后立即把瓶密封，摇动顶空瓶使样品分散到溶液中，之后置于气相色谱仪的自动进样器中，进行顶空气相色谱分析。
　　(b)如果样品中含有更强的酸，就会和碳酸氢钠溶液立刻反应产生出二氧化碳，所以既要把样品和碳酸氢钠溶液的混合在顶空瓶密封之后进行，因此设计了如图3的方式，即把碳酸氢钠置于一个小试管中，等顶空瓶加上隔垫盖之后，使之倾倒与样品反应。

图3 测定纸浆中羧基的顶空样品瓶

4 用反应顶空气相色谱测定氧脱木质素过程溶液中的草酸盐
　　( JChromatogr A,2006,1122:209-214)
　　测定造纸过程中氧脱木质素液体中的草酸盐对研究工艺条件有重要作用，大家从基础分析化学知道，测定草酸盐用高锰酸钾标准溶液以滴定法进行测定，反应如下：

　　这一反应在提高温度是会加速反应，以高锰酸钾的消耗量进行定量，但是这一反应如果样品中含有还原物时不能使用，如有机物，氧脱木质素液体很复杂，其中的草酸盐不能用此法进行定量分析。但是柴欣生教授的研究组把反应顶空气相色谱【他们叫做”相变反应”(Phase conversion reaction,PCR)顶空气相色谱】与他们以前研究的“多次顶空萃取”(multiple headspace extraction)(用于测定造纸厂黑液中甲醇形成的动力学研究(J Chromatogr A,2002,946:177-183)气相色谱相结合来解决这一问题。
　　氧脱木质素液体中的草酸盐与酸性高锰酸钾反应很快便产生出二氧化碳，但是和其中的有机物经氧化反应产生出二氧化碳要慢得多，因此可以用测定后者产生规律和数据来修正测定氧脱木质素液体中的草酸盐含量的方法。(这一方法相对复杂一些，由于篇幅不做详述，有兴趣的可以阅读柴教授的原文)。
　　柴欣生教授的研究团队还有许多文章阐述反应顶空气相色谱的应用，这里无法一一介绍。

　　下面列出部分相关的文献供读者参考：

序号	题目	原始文献
1	制浆过程废液挥发性有机化合物的生成规律（顶空气相色谱法）	J. Pulp Paper Sci., 1999, 256-262.
2	顶空气相色谱分析复杂基质中的非挥发性物质	J. Chromatogr. A, 2001, 909:249-257.
3	木质纤维羧基含量: 1.顶空气相色谱法测定羧基含量	Ind. Eng. Chem. Res., 2003, 42: 5440-5444.
4	顶空气相色谱测定酸和碱组分	J. Chromatogr. A, 2005, 1093:212-216.
5	顶空气相色谱测定木质素的甲氧基含量	J. Agric. Food Chem., 2012, 60: 5307-5310.
6	顶空气相色谱快速测定纸浆漂白废液的过氧化氢含量	J. Chromatogr. A, 2012,1235:182-184.
7	顶空气相色谱测定丁二酸酐改性纤维素的取代度	J. Chromatogr. A,2012,1229:302-304.
8	一种实用的顶空气相色谱法测定纸浆漂白废液的草酸根含量	J. Ind. Eng. Chem., 2014,20:13-16.
9	一种新颖的顶空气相色谱法分析乙基纤维素的乙氧基含量	Anal. Lett., 2012, 45: 1028-1035.
10	顶空气相色谱技术快速测定个护用品中的甲醛含量	Anal. Sci., 2012, 28: 689-692.
11	顶空气相色谱测定以甲醛为原料的聚合物乳液中的残余甲醛含量	J. Ind. Eng. Chem.,2013,19:748-751.
12	顶空气相色谱法检测纸浆中羰基含量的研究	中国造纸, 2014,33(10): 36-39.
13	静态顶空气相色谱技术	化学进展, 2008,20(5): 762-766.

5 更多反应顶空气相色谱的应用
　　国内还有不少学者在许多领域使用反应顶空气相色谱解决诸多分析问题，下面列出一些用例。

序号	题目	方法要点
1	顶空进样-气相色谱法测定大气中吡啶的研究	用硫酸溶液为吸收液采集大气中的吡啶，吸收液倒入20 mL 顶 空瓶中，加入3 g 氯化钠，少量氢氧化钠，调节pH为12，密闭摇匀至所加盐全部溶解，于顶空进样器进样，气相色谱仪分析。	王艳丽等，中国环境监测，2013,29（2）：62-64
2	顶空气相色谱法测定粮食中的氰化物	称取试样5-10 g于100 ml顶空管中加入 纯水至80 ml, 混匀, 在超声波清洗器中超声提取20 min, 取出, 分别加入磷酸盐缓冲溶液1.0 ml和1%氯胺T溶液0.25 ml, 立即用橡胶反堵胶塞密封, 混匀, 置于40℃恒温水浴中, 反应及平衡50 min, 抽取顶空气体100 μl注入气相色谱仪进行测定。	刘宇等，中国卫生检验杂志2009，19（3）：552-553
3	顶空气相色谱法测定膨化大枣中的亚硫酸盐含量	将粉碎样品放入500mL 顶空瓶中, 加入浓盐酸, 在40℃恒温水浴中反应10min, 亚硫酸盐在酸性条件下转化为SO2气体, 取顶空气体进行气相色谱分析。通过测定气相中二氧化硫的含量, 间接测定样品中的亚硫酸盐含量	王晓云等，山东化工，2007,36（1）：36-38
4	使用自动顶空进样器测定梨中代森锰锌残留量的电子捕获气 相色谱法	在20 mL 顶空瓶中加入0.1 g 抗坏血酸、0.2 gEDTA 络合物，然后称取5.0 g 匀浆后的样品于此顶空瓶中，再加入10 mL 预先配制好的氯化锡盐酸溶液，加盖密封，超声震荡2 min，然后在水温为80℃的水浴锅中加热2 h，每隔30 min 摇匀一次，摇匀时间为1 min，待反应完成，稍冷，然后置于自动顶空装置托盘，顶空平衡温度60℃，平衡时间3 min，分析反应产生的二硫化碳	聂春林等，精细化工中间体，2010,40（6）：63-66
5	测定尿中三氯乙酸的自动顶空气相色谱法	尿中的三氯乙酸加热脱羧生成三氯甲烷进星气相色谱分离，，取5 ml 样品移入顶空瓶中，同时取5 ml 双蒸水作为空白对照，立即加盖密封。顶空瓶放入90 ℃水浴中150 min，然后依次放入顶空装置内，启动自动进样分析	李添娣等，职业与健康 2012，28（16 ）：1982-1983

小结：化学反应很神奇，利用它创造出瑰丽的世界，制造出无数无奇不有的物件，满足人们的各种需求，为人们提供了绚丽多彩的生活条件。利用化学反应把本来不能进行顶空气相色谱的样品变为可能，大大提高了它的应用范围。这一方法是有限的，但是这一思路是无限的。
致谢：感谢柴欣生教授提供部分资料并对本文进行审阅和修改。