⑵. 鱼和动物组织净化
①. 原理
为避免在净化过程中出现超净化能力的现象,应细心称量提取出的脂肪量。经过乙腈和石油醚液-液分配,可以将脂肪中的残留农药分离出来。在乙腈和石油醚分配体系中,大多数脂肪留在石油醚相,而残留农药则进入乙腈相中。当向乙腈相中加入水时,可以降低农药在乙腈中的溶解度,使乙腈相中残留农药重新分配到石油醚相中。
在弗罗里硅土吸附柱上将溶液中残留农药从样品共提物中分离出来;用极性递增的淋洗液将柱上的农药残留洗脱下来。
②. 测定脂肪量
净化方法可用于≤3g脂肪。从提取的脂肪溶液中蒸发掉溶剂后,按下列操作步骤之一来测定提取的脂肪量:
当样品中总脂肪含量>3g时,并且分析的残留农药是不易挥发的,可用少量石油醚将浓缩提取液转移到已称量的烧杯中,用干空气流在蒸汽温度下吹干。称量并记录提取脂肪的质量。取 ≤3g的脂肪用于净化。按下式计算分析样品的重量:
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当已知样品中的脂肪含量<3g时,不必进一步蒸发溶剂,净化全部脂肪溶液样品。以原样重量为分析样品重量。
当已知脂肪含量>3g或者残留水平很高时,不必进一步蒸发溶剂,取已知、适量体积的提取溶液,转入已称量的烧杯中。蒸掉溶剂,称量测定脂肪含量。净化含有≤3g脂肪,按下式计算分析样品的重量:
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③. 乙腈/石油醚液液分配
称取≤3g脂肪放入125mL的分液漏斗中,添加石油醚使分液漏斗中的脂肪和石油醚总体积为15ml 。如果液-液分配时,出现产生乳化现象的趋势时,石油醚用量可更少。
加入石油醚饱和的乙腈30mL,剧烈振摇1min,静止分层,将乙腈相转入已预先加入650mL水、40mL饱和氯化钠和100mL石油醚的1L分液漏斗中。
在125mL分液漏斗中用以石油醚饱和的乙腈每次30mL提取石油醚3次,每次剧烈振摇1min,将全部提取液合并于1L的分液漏斗中。
将1L的分液漏斗横置,充分混合30—45秒,静止分层。水相转入第二个1L的分液漏斗。
在第二个1L的分液漏斗中加石油醚100mL ,剧烈振摇15秒,静止分层。弃去水相,将石油醚相合并到原先的1L分液漏斗中,并用100mL?2水洗涤。
弃去洗涤液,将石油醚相通过25mm?50mm的无水硫酸钠柱子转入K-D瓶中。用10mL?3的石油醚依次淋洗分液漏斗和无水硫酸钠柱。
在K-D瓶中加入沸石,将合并的提取液和淋洗液浓缩至5-10mL转移到弗罗里硅土柱,净化。