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主题：【分享】出现非特异性扩增带

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wwwkkk83
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发表于：2007/01/03 17:38:00 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊

　　PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致，或大或小，或者同时出现特异性扩增带 
与非特异性扩增带。非特异性条带的出现，其原因：一是引物与靶序列不完全互补、 
或引物聚合形成二聚体。二是Mg2+离子浓度过高、退火温度过低，及PCR循环次数 过多 
有关。其次是酶的质和量，往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的酶 则不出 
现，酶量过多有时也会出现非特异性扩增。其对策有：①必要时重新设计引 物。②减低 
酶量或调换另一来源的酶。③降低引物量，适当增加模板量，减少循环次 数。④适当提 
高退火温度或采用二温度点法(93℃变性，65℃左右退火与延伸)。 
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2007/1/4 20:46:00 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
其实最容易出现假阳性的原因还是污染。要注意防止污染才是根本。当然酶也很重要。正如楼上所说。
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xbb715
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2007/3/24 20:51:00 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
引物设计问题，
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licca1021
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2007/9/16 19:13:00 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
引物设计不合适吧
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sqzz2000
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2007/12/25 10:00:12 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
顶，支持一下
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