主题:【求助】关于未知化合物HPLC的方法开发问题

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m3116636
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一个未知 的复杂化合物,查不到文献,以下为其大概的结构式,分子量约700多,以下尝试了几种方法、

刚开始用的溶剂是乙腈,体系为TFA乙腈体系,无法得到理想的峰形,而且尝试了很多种都不可以,后来尝试可一个梯度,这个梯度下出峰尖锐,但是并不理想,有峰未分离开来。
(这个梯度是尝试了很多种后选择的分离度相对较好的条件。)
梯度:0    50%  50%
          5    50%  50%
          9    15 %  85%
          17    15%    85%
          19    5%      95%
          27    5%      95%
        27.01  50%    50%
后来尝试往有机相加了一定比例的甲醇,约30%(尝试过15-45%)基本差不多。
乙腈溶解,0.1%TFA和30%+70%乙腈做流动相,梯度跟上图一样,出了两个峰,但实验员反映,打过核磁没有发现同分异构体也没有其余杂质。
如下图

后来怀疑会跟流动相中的甲醇反应,于是将溶剂换成了甲醇,梯度流动相与上图一致,发现峰变成了一个,全部转化为左边峰,证明产品会与甲醇反应。
(也试过异丙醇,一样会反应)
如下图。

因此这个体系不可取了,实验员认为TFA可能也会与化合物反应,并且猜测化合物为中性,让用纯水,但是在我看来中性化合物的话,PH的影响对其在液相中的保留时间分离度不会有明显变化,但是还是尝试了一下纯水体系。
乙腈溶解,纯水和乙腈作为流动相,梯度与上面相同,保留时间延后,分离度变好。但是左边依然有一个峰,这与最开始TFA和乙腈体系下有点相似,左边有一个未分离开来的小峰,在这个体系下分开了。那么说明这个化合物并非是中性化合物吗?
如下图

为了证明左边的峰是否是与甲醇反应的峰一致,于是又进了一针甲醇溶解的,梯度进样量与上相同。结果变成了三个峰,第三个峰变小了,中间的峰变高,并且多了第一个峰……

就以上几种尝试多了很多无法想通的问题:
1、这个化合物到底是偏中性还是碱性。
2、在TFA体系下,甲醇溶解后进样只出一个峰,而在纯水体系下,却出了三个峰,那么是否说明起始在TFA的体系下也有三个峰,只是未能完全分开。
3、谁做过类似的化合物,是否有较好的分析方法呢?
最新的情况:
还有一个化合物跟上面的相似,是其前一个步骤称为化合物1,只有一个基团不同,就是右下角是羟基,其余一样,上面那个就称为化合物2
然后我们用上面的方法,TFA体系和纯水体系,有机相都为乙腈的条件下走了两针。
在TFA体系下峰形良好,出峰时间约18.7,在中性体系下,峰形宽胖,出峰时间15.0min。
然后呢还得知了其PKA值为6.7左右,上面那个化合物2PKA值5.3左右。
那么为了更好的分离这两个物质,我选择的流动相应该PH在多少?
已知TFA/磷酸这种较弱的PH下不可以分离,两个化合物峰靠的很近。
在纯水体系下,两个化合物分离的很远,带羟基的化合物1出峰时间15.0min,但是峰形宽胖,带醛基的化合物2出峰时间27min,分离度良好,但是时间太靠后,试了好多其他梯度都没办法解决。
我准备尝试0.1%的氨水体系,不知道是否可以。
有没有其他更好的调节方式呢?望指教~~~
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hujiangtao
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有水有渝
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那质谱又是用的什么流动相,如果甲醇、乙腈都会反应,那不可能质谱上只看出一个物质
m3116636
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原文由 有水有渝(xky0230699) 发表:
那质谱又是用的什么流动相,如果甲醇、乙腈都会反应,那不可能质谱上只看出一个物质
不是质谱,是核磁
有水有渝
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不是质谱,是核磁
不好意思,没看清。还是要跟研发人员弄清楚,在不同流动相中可能存在的形态。
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不好意思,没看清。还是要跟研发人员弄清楚,在不同流动相中可能存在的形态。
这个东西是未知的,研发人员也是一步步摸索发现其与醇会反映,碱性条件下会反应 - =
有水有渝
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这个东西是未知的,研发人员也是一步步摸索发现其与醇会反映,碱性条件下会反应 - =
那试过0.1%磷酸-乙腈体系吗?
dadgoh
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原文由 m3116636(m3116636) 发表: 不是质谱,是核磁
核磁用的什么溶剂。