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液相色谱（LC）
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主题：【求助】液相色谱做阿胶4个氨基酸测定只出3个峰，求大神帮忙

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ppp211530
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发表于：2019/08/13 11:10:14 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
柱子是迪马钻石 C18 5um 250*4.6mm 柱体积4.2ml 流动相和对照品的制备全部按照药典规定进行：
以乙腈-0.1mol／L醋酸钠溶液(用醋酸调节pH值至6.5)(7：93)为流动相A，以乙腈-水(4：1)为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为254nm；柱温为43℃。理论板数按L-羟脯氨酸峰计算应不低于4000。
时间(分钟)  流动相A(％)  流动相B(％)
0～11      100→93    0→7
11～13.9  93→88      7→12
13.9～14  88→85      12→15
14～29    85→66      15→34
29～30    66→0      34→100
对照品溶液的制备取L-羟脯氨酸对照品、甘氨酸对照品、丙氨酸对照品、L-脯氨酸对照品适量，精密称定，加0.1mol/L盐酸溶液制成每1ml分别含L-羟脯氨酸80μg、甘氨酸0.16mg、丙氨酸70μg、L-脯氨酸0.12mg的混合溶液，即得
精密量取上述对照品溶液和供试品溶液各5ml，分别置25ml量瓶中，各加0.1mol/L异硫氰酸苯酯(PITC)的乙腈溶液2.5ml，1mol/L三乙胺的乙腈溶液2.5ml，摇匀，室温放置1小时后，加50％乙腈至刻度。摇匀。取10ml，加正己烷10ml，振摇，放置10分钟，取下层溶液，滤过，取续滤液，即得。
出图如下：
图1是走空白基线的图
图2是进样后出图
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xky0230699
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2019/8/13 16:06:00 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
18分钟那不是有一个峰没分开吗？把梯度中的B相的比例降一点看看能不能分开
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2019/8/13 16:09:00 Last edit by xky0230699
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