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液相色谱（LC）

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主题：【求助】这里有黄曲霉毒素检测解决方案，请注意查收！！！

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落紫檀

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发表于：2019/10/22 15:31:36 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

什么是黄曲霉毒素
黄曲霉毒素是主要由黄曲霉、寄生曲霉产生的次生代谢产物，在湿热地区食品和饲料中出现黄曲霉毒素的机率较高。B1 、B2和G1、G2，就是经常经常出现在农产品中的黄曲霉毒素的代表，毒性较强的排行“B1”，B表示蓝色，因为它在紫外光的照射下会发出蓝色荧光。除了亲兄弟B2之外，它还有堂兄弟G1和G2，因为在紫外光下发射黄绿色荧光而得名。

为什么要检测黄曲霉毒素

当人摄入大量的黄曲霉毒素时，可发生急性中毒，出现急性肝炎、出血性坏死、肝细胞脂肪变性和胆管增生。当微量持续摄入，可造成慢性中毒，生长障碍，引起纤维性病变，致使纤维组织增生。AFT的致癌力也居首位，是目前已知致癌物之一。

方法简介

本方法是采用免疫亲和柱净化，液相色谱荧光检测黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2，严格按照2015版药典相关要求，此法适用于各种中药材、饲料、食品等几十种黄曲霉的检测。

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落紫檀

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2019/10/22 15:32:05 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

1、样品制备
黄曲霉毒素可致癌，应戴手套操作，使用之前所有的试剂和板条的温度回升至室温20-25℃，使用之后立即放回2-8℃保存。
①均质
所有样品必须完全均质，以确保样品具有代表性（样品均质办法可咨询本公司400-1158-566）
②提取
不同的基质提取的方法有所不同，谷物类及复杂基质提取方法也不一样
③净化
净化步骤：将免疫亲和柱固定于固相萃取装置上，用10ml PBS活化免疫亲和小柱，流速保持在2-3ml/min，确保上样前柱子保留少量（约0.5ml）的PBS，不同的基质净化方法略有不同。

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落紫檀

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2019/10/22 15:33:00 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

2、仪器分析
由于黄曲霉毒素B1和G1本来具有较强的荧光性，但接触水之后，发生荧光的淬灭现象，荧光性基本消失，很难用液相色谱检测出来，采用衍生的方法可使黄曲霉B1和G1的荧光性增强，光化学衍生装置不需要任何化学试剂，直接连接于色谱柱与荧光检测器质检，操作简单，检测结果准确，灵敏度高。
实验仪器
APS80-16A高效液相色谱仪
RF-20A荧光检测器
APS-2290光化学衍生器

3、色谱条件
色谱条件1
色谱柱：XB-C18，4.6*150mm,5um
货号：90201-31041（GD）
流动相：洗脱液 A：水
洗脱液 B：甲醇/乙腈 80/20（v/v）等度A/B=40/60
流速：0.8ml/min
柱温：35℃
进样体积：100ul
荧光检测器：激发：365nm 发射：450nm
经色谱柱分离的黄曲霉毒素需经过光化学衍生器衍生
出峰顺序：G2、G1、B2、B1

色谱条件2
色谱柱：XB-C18，2.1*100mm,1.8um
货号：90201-11012（GD）
流动相：甲醇/乙腈/水=18/18/64
流速：0.35ml/min
柱温：35℃
进样体积：20ul
荧光检测器：激发：365nm 发射：450nm
出峰顺序：G2、G1、B2、B1

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