最近用C18柱分离四个相似结构的化合物。
流动相为:20%甲醇:50%甲醇-50%乙腈=60:40
我用一根相对高效的C18柱分离这四个,其出峰时间,分离度都还能满意,除了其中一个峰有点倾斜以外,其余都还符合预期。
然而当我用一根相对普通的C18柱分离时,发现其峰形异常,走了好几针都一样,正常而言,除了保留时间和分离度会有些变化以外不应该这样。
于是怀疑色谱柱柱效降低的原因,于是更换了一根相对比较新的普通C18柱,与上面那根同款,使用时间短一些,发现分离度尚可,但是有一个峰保留时间<3min,且峰形略倾斜,塔板数<5000。
峰形异常的普通C18柱流动相为0.1%磷酸+乙腈,配保护柱,使用约9个月,一周5-6天,每天约50个样,且样品溶剂相对复杂。
峰形略倾斜的普通C18柱流动相为0.1%TFA+乙腈,配保护柱,使用约5个月,一周5-6天,每天约30个样,样品分子量较大。
分离度良好的高效C18柱流动相为0.1%磷酸+乙腈,配鬼峰柱,无保护柱,使用约一个月,样品较少,偶尔分析成品样,样品简单。
以下为三张图。
普通色谱柱在正常使用情况下一般使用限为多久?
像图一的色谱峰,这根柱子走保留相对较久的样品时峰形又比较好,比较对称,那么是否应该继续使用,如何挽救?
图二这种图,是否代表色谱柱柱效已开始有降低的情况?
图三为新的相对高效的色谱柱,最前面一个峰出峰位置为5min,其峰形不好是跟保留时间有关系还是跟色谱柱的选择性有关系呢?
原文由 qhz0823(v2947939) 发表:好的谢谢回答,不过第一个跟第二个图的色谱柱是同一款,只是使用时间不同,第一个用了9个月,第二个用了5个月
虽然同为C18色谱柱,但是色谱柱品牌甚至填料批次对色谱柱的性能都有影响,并且色谱柱对不同的样品选择性不一样,分析一个样品,色谱图不好,并不一定是色谱柱柱效下降,可能是这根色谱柱不适合分析此样品,评价色谱柱性能的高低,建议按照厂家说明书的提供的评价方法,对色谱柱进行评价,在此评价方法下,柱效低于一定的理论踏板数,则表明色谱柱柱效降低,可能到了报废的情况。从提供的三张谱图来看,第二张色谱图用的色谱柱可能存在柱效降低的情况。