主题:【求助】液相不同方法走出来的样品纯度不同?!!

浏览0 回复8 电梯直达
提莫酱爆小蘑菇
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有一个项目,最终产品为3-氨基-2-甲基苯甲酸,这个产品用的中控方法是等梯度,产品出峰3.1min,异构体出峰2.8min

前不久开发出来成品的放行方法,走梯度的,产品出峰5.3min,异构体出峰约6min

但是最近第一批成品出来,实验员用中控方法走完了以后给我这边提交了成品全检申请。

我用成品的方法走了以下,发现纯度与中控的方法略有不同。

而最大的问题在于,中控方法中明显有一个2.8min的峰,这个时间是异构体保留时间的位置占比0.3%,比例相当大。

而我这边用成品方法中走的产品6min并没有异构体的峰,是一点都没有。

这样导致纯度相差了至少3个点。

(两者波长略有不同,但是并不影响结果,因为两者吸收在210与220下基本一致)

请问这可能有什么原因导致的?

等梯度方法:A:0.1%磷酸,B:乙腈:甲醇=55%:45%,A:B=60:40等梯度

梯度方法:

流动相A1.38g磷酸二氢钾溶于1000ml水中,完全溶解后加入0.5ml磷酸,配制成0.01M的磷酸盐缓冲液,混匀,超声脱气。

流动相B乙腈:甲醇=7030

梯度洗脱程序:

时间(min)

流动相A%

流动相B%

0.01

90

10

5.00

90

10

10.00

50

50

15.00

50

50

18.00

20

80

23.00

20

80

23.01

90

10

32.0

 

Stop

以下为中控方法的图:


成品方法的图:


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有水有渝
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这个是标准方法吗,如果不是标准方法,说明原来制定标准的时候方法学验证不完善,方法不适用。2.8min会是溶剂峰吗?
提莫酱爆小蘑菇
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原文由 有水有渝(xky0230699) 发表:
这个是标准方法吗,如果不是标准方法,说明原来制定标准的时候方法学验证不完善,方法不适用。2.8min会是溶剂峰吗?


==!抱歉,是我柱子用错了……

但是依然有个问题,经常出现,就是样品中的溶剂峰高于空白中的溶剂峰,比如空白的峰高5mv,样品是7.5mv

这种情况如何判断呢?
有水有渝
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样品空白等同溶剂空白吗,这种情况只能做一个样品空白看看
浪淘沙隐
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提莫酱爆小蘑菇
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原文由 有水有渝(xky0230699) 发表:
样品空白等同溶剂空白吗,这种情况只能做一个样品空白看看
样品空白怎么做?
提莫酱爆小蘑菇
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原文由 浪淘沙隐(zhoujin83) 发表:
保留太弱,出现干扰太正常。


这个保留很差,正常方法下保留都在3min左右,调了一些流动相,换了更强极性更弱的C18柱才把时间延后,但是其原料,杂质等等,极性又较弱,出峰较晚,所以为了让杂质分离的同时增加产品保留时间,只能让保留时间略微靠前但又不至于到3min钟去了-——!
浪淘沙隐
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原文由 提莫酱爆小蘑菇(m3116636) 发表:

这个保留很差,正常方法下保留都在3min左右,调了一些流动相,换了更强极性更弱的C18柱才把时间延后,但是其原料,杂质等等,极性又较弱,出峰较晚,所以为了让杂质分离的同时增加产品保留时间,只能让保留时间略微靠前但又不至于到3min钟去了-——!
有N种方法增加保留。
有水有渝
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原文由 提莫酱爆小蘑菇(m3116636) 发表:
样品空白怎么做?
就是除了不含待测组分外,其它成分与样品一样
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