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主题：【已应助】菜鸟请教高手液相色谱图相关问题

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whrboy
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发表于：2019/12/09 13:12:18 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
刚开始做液相分离抗菌肽，初步做出一个色谱图，但不知如何改进色谱条件来获得更好的分离效果，请大家指点指点啊！谢谢！
色谱条件如下
流动相：乙腈，水梯度洗脱
        0-2min：乙腈80%
        2-4min：乙腈80%-60%
        4-10min：乙腈60%-80%  这个洗脱梯度不知道是否合理，请大家指点指点吧
流速：1ml/min
色谱柱：ODS HYPERSIL Dim（mm）300*4.6
检测波长：UV280nm
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2019/12/9 13:26:34 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
1、一般情况下，分离肽类样品流动相中应加入离子对试剂TFA（0.05-0.1%），你可以根据你的样品进行试验；
2、梯度设置肯定有问题，样品在3分钟左右基本出完，而且没有分离，说明你开始的有机相比例过大，建议有机相从30%左右开始，以每分钟两个比例的梯度增加至90%，然后根据谱图再进行细调。
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