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主题：【已应助】蛋白膜的性能与其中的巯基和二硫键含量息息相关，本人也看了很多测定二硫键的方法，但在方法描述上不一，版本众多，不知有哪位高人可否贡献一下方法，感激不尽！

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发表于：2020/01/19 11:34:15 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

蛋白膜的性能与其中的巯基和二硫键含量息息相关，本人也看了很多测定二硫键的方法，但在方法描述上不一，版本众多，不知有哪位高人可否贡献一下方法，感激不尽！

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2020/1/19 11:37:04 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

取磷酸化反应混合液2ml，加入10ml pH=8.0的Tris盐酸缓冲液和0.05ml Ellmans试剂（5，5-二硫双（2-硝基苯甲酸）），迅速混合，室温下显色20min后，测定其在412nm处的吸光度。实验中以不加样品、而加Ellman试剂为空白，以不加Ellman试剂、而加样品的溶液测定其浊度。样品中浸提出的蛋白质用福林酚法比色测定。则样品中SH含量的计算公式如下：
SH（μmol/g）=（73.53?A412?D）/C
式中，A412—有DTNB存在时样品吸光度-无DTNB存在时样品吸光度；D—稀释倍数，对于SH，D=3.02?5=15.1；对于二硫键，D=（3.05/0.2）?5=；C—样品中蛋白质含量，g。

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