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液相色谱（LC）
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主题：【已应助】标准曲线做不好

浏览0 回复21 电梯直达
Insp_c86406cd
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发表于：2020/03/27 23:06:57 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
先上方法：C18柱，5um，4.6mm*250mm，柱温30℃，0.7ml/min，进样量20uL，流动相A：5.0g庚烷磺酸钠，B：乙腈，A:B=80:20

这个方法是文献提供的，现在用同样的方法，测标准品测不准。配制了2个标准品，一个是0.8mg/ml，一个是0.86mg/ml，用峰面积相互

算含量，误差超过10%！然后又从0.46mg/ml到10.2mg/ml之间做了5个点，每2个点相互算含量误差都超过10%！

对照文献发现，同样的样品浓度和进样量，文献的峰高有600多mAU，我的只有不到100。我做的标准品比文献多一个峰，要命的是后面那个

小峰的分离度只有0.9左右。紫外检测器氘灯已经使用5100多小时。

请问，分离度不够和标准品互相测不准是因为氘灯能量不够的原因吗？这个还挺重要的，因为换个氘灯不便宜，要是申请换了氘灯还测不准，

跟领导不好交代（扣空白基线试过了，误差还是超过10%）。图在后面回帖用手机发。
推荐答案：sdlzkw007回复于2020/03/28
首先是保留时间与文献相差太大，其次是仪器响应太低，需要通过萘标准溶液（购买）核查一下仪器是否满足要求。第三是需要更高柱效的分离色谱柱对照试验。
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2020/3/28 10:01:27 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
图一是文献的图，图二是我做的
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未来工程师
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2020/3/28 11:07:41 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
先试试重复性如何
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hujiangtao
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2020/3/28 11:17:06 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
柱子也是和文献一样的吗？也有可能是标准品不纯的原因
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Insp_c86406cd
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2020/3/28 11:36:49 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 未来工程师(v3214185) 发表:先试试重复性如何
重复性做过两次，一次是峰面积相差0.9%，一次差0.4%
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Insp_c86406cd
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2020/3/28 11:38:44 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 hujiangtao(hujiangtao) 发表:柱子也是和文献一样的吗？也有可能是标准品不纯的原因
色谱柱规格参数一样的，都是c18，品牌不一样的。
我们领导的意思标准品纯度不需要那么高，我们只是要那个峰的面积，其它杂质不影响目标峰面积。
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hujiangtao
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2020/3/28 11:40:15 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 Insp_c86406cd(Insp_c86406cd) 发表:色谱柱规格参数一样的，都是c18，品牌不一样的。我们领导的意思标准品纯度不需要那么高，我们只是要那个峰的面积，其它杂质不影响目标峰面积。
现在的问题是可能杂质干扰测定了，把有机相比例降低一些看看能不能把干扰分开
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Insp_c86406cd
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2020/3/28 11:41:23 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 hujiangtao(hujiangtao) 发表:现在的问题是可能杂质干扰测定了，把有机相比例降低一些看看能不能把干扰分开
好的，周一试试
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Insp_c86406cd
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2020/3/28 11:42:47 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 hujiangtao(hujiangtao) 发表:现在的问题是可能杂质干扰测定了，把有机相比例降低一些看看能不能把干扰分开
如果是杂质干扰的话，为什么同一个标准品配制的两个样品会互相测不准？
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hujiangtao
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2020/3/28 11:44:30 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 Insp_c86406cd(Insp_c86406cd) 发表:如果是杂质干扰的话，为什么同一个标准品配制的两个样品会互相测不准？
可能后面峰干扰，仪器走别的组分精密度怎么样
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Insp_c86406cd
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2020/3/28 11:45:24 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 hujiangtao(hujiangtao) 发表:可能后面峰干扰，仪器走别的组分精密度怎么样
这个没试过。一般液相峰面积的重现性是要求多少的？
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