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主题：【分享】【实战宝典】高压梯度洗脱与低压梯度洗脱有什么区别？

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发表于：2021/03/22 15:34:48 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
解答：梯度洗脱有两种实现方式：低压梯度（内梯度）和高压梯度（外梯度）。

（1）低压梯度：流动相在低压下混合，然后用高压输液泵将流动相输入到色谱柱，因此对硬件的要求较低，其梯度的实现主要由电磁阀的开关来进行控制，只需一台泵、一台容积组织器和一台动态混合器，即可配置成四元梯度系统。优点是成本较低，系统的故障率较低，维护较为方便，此外，由于流动相是在常压下混合，不存在流动相的压缩，故而梯度准确度较好。缺点是精度比高压梯度略差。

（2）高压梯度：流动相的混合是在高压下进行，所以该系统在硬件上需多台同样的输液泵的组合，而后经动态混合器进行混合，并有专用的软件模块进行控制。优点是梯度精度较高，但缺点是成本较高，硬件较多；而流动相的可压缩性和流动相混合时的热力学体积的变化，可能影响输入到色谱柱的流动相的组成，所以，梯度的准确度会出现偏差，另外，高压梯度洗脱过程中为保证流速稳定必须使用恒流泵，否则很难获得很好的重复性结果。

（3）从硬件价格上看，高压比低压贵不少。两者最大的区别还是在流动相可能出现的气泡上。在同样的两种流动相混合时，高压混合所产生的气泡几率要比低压混合时少。在四元低压梯度系统中，在线脱气机在混合前先脱气，使气体远远低于其在溶剂中的饱和溶解度，混合后一般也不会达到其在混合溶剂中的最大溶解度，所以一般不会有气泡产生。混合后脱气是不可行的，因为混合后脱气，会在一定程度上改变混合比例（各种溶剂的饱和蒸气压不同决定）。另外，混合前脱气能提高流量精度，这点更有意义。而高压梯度是泵后混合，此时气体在溶剂中的溶解度会增大（溶解度随压力增大而增大），所以一般也不会有气体溢出而产生气泡了。

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