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液相色谱（LC）
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主题：【分享】【实战宝典】流动相加缓冲液和调节pH值的原则有哪些？

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发表于：2021/03/22 15:37:10 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
解答：（1）在液相色谱分析中，选择正确的流动相pH值，对可解离化合物的分析十分重要：不恰当的pH值可能导致不对称峰、宽峰、分裂峰或肩峰，而尖锐、对称的峰是定量分析中获得低检测限，以及样品好的平行性和保留时间高重现性的前提。在反相色谱中，流动相的pH值一般在2~8之间（硅胶填料色谱柱pH耐受范围），当被测物可解离或样品pH值在2~8之外时，往往需要在流动相中加入一些改性剂（如酸/碱/缓冲盐）以改善其峰型或保留。

（2）在选择缓冲液pH值之前，应先了解被分析物的pKa，从HH公式：pH = pKa + log([A-]/[A])得知，当一种化合物的pKa = pH时，其有一半解离；当溶液pH值高于或低于pKa两个单位，化合物99%以上以一种形式存在（完全解离或完全未解离），这时有利于获得对称的峰型。因此几乎所有与pH相关的保留值变化基本都发生在pKa±2个单位的pH值范围内，超出这个范围，其保留值随pH变化不大。图5-4可以看出流动相不同pH值，对某些物质保留值和分离度影响很大。

（3）综上所述，如果待测组分在反相色谱上保留弱，则需要调节流动相pH小于（酸性）/大于（碱性）pKa两个单位，使其绝大部分呈分子状态以增加其在反相色谱柱上保留。若出现组分共流出情况，我们可以根据其各自分子结构特点来调节pH增加分离度：如一种物质含有氨基（另一种不含），则可以降低流动相pH值，含氨基组分就会发生解离减弱在色谱柱上保留，从而实现分离目的。

                                                               

图5-4不同pH值的分离色谱图



                        1—对位甲氧基苯胺；2—间位苯甲胺；3—3-氨基-苯甲腈；4—对位氯苯胺；5—间位氯苯胺；6—邻位氯苯胺

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