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液相色谱（LC）
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主题：【已应助】HJ638-2012，求分享色谱条件。

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不唱歌鲸鱼
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发表于：2021/09/08 15:09:52 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
新手，用TM的标根据Hj638参考条件做了几个色谱图，再用TM参考条件做了几针，出来的图实在是不忍直视，峰分不开，不知道有没有哪位大神有现成的条件分享一下或者能指导一下怎么调。配置，安捷伦1260，柱子C18 4.6x150mm，4um，紫外检测器。
推荐答案：检测老菜鸟回复于2021/09/08
第一个，首先你先走个空白，把残留给走出来好吧。然后再来聊这个条件。
第二个，给你个通用方法，如果是反相色谱，分离不好的话先降流速。如果是前面分离不好就增加有机相低比例的保留时间。后面分离不好就增加有机相高比例的程序时间。
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检测老菜鸟
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2021/9/8 16:08:29 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
第一个，首先你先走个空白，把残留给走出来好吧。然后再来聊这个条件。
第二个，给你个通用方法，如果是反相色谱，分离不好的话先降流速。如果是前面分离不好就增加有机相低比例的保留时间。后面分离不好就增加有机相高比例的程序时间。
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ztyzb
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2021/9/8 16:12:51 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
楼主，不同设备条件有差异，附上征求意见稿里面的条件选择，可以试一下，验证单位也有安捷伦的设备。
附件：
征求意见稿编制说明.pdf
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通标小菜鸟
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2021/9/8 16:32:38 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我用的色谱柱：安捷伦Zorbax SB-C18 (250mm × 4.6 mm × 5mm)，图中是实验条件，楼主参考一下
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安平
byron1111
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2021/9/8 20:50:06 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
        首先需要运行空白梯度，即不进样执行梯度洗脱，得到的基线，应当不含有鬼峰。

        如果有，那么建议处理流动相，清洗hplc系统。

        其次运行溶剂空白，考察干扰色谱峰是否来自于溶剂。

        再次进样标品，考察分离情况。 如果分离不良，调整流动相组成，修改梯度或者更换色谱柱。
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不唱歌鲸鱼
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2021/9/8 22:23:57 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 检测老菜鸟(v3295053) 发表:
第一个，首先你先走个空白，把残留给走出来好吧。然后再来聊这个条件。
第二个，给你个通用方法，如果是反相色谱，分离不好的话先降流速。如果是前面分离不好就增加有机相低比例的保留时间。后面分离不好就增加有机相高比例的程序时间。
谢谢，我明天在调试看看。
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不唱歌鲸鱼
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2021/9/8 22:24:50 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 ztyzb(zxz19900120) 发表:
楼主，不同设备条件有差异，附上征求意见稿里面的条件选择，可以试一下，验证单位也有安捷伦的设备。
谢谢，很有帮助，正好目前就是做这个标准的方法验证。
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不唱歌鲸鱼
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2021/9/8 22:33:23 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 安平(byron1111) 发表:
        首先需要运行空白梯度，即不进样执行梯度洗脱，得到的基线，应当不含有鬼峰。

        如果有，那么建议处理流动相，清洗hplc系统。

        其次运行溶剂空白，考察干扰色谱峰是否来自于溶剂。

        再次进样标品，考察分离情况。 如果分离不良，调整流动相组成，修改梯度或者更换色谱柱。
谢谢，空白基线都是好的不含杂峰，我再修改下分析条件试试看。
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不唱歌鲸鱼
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2021/9/8 22:36:52 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 通标小菜鸟(v3141805) 发表:
我用的色谱柱：安捷伦Zorbax SB-C18 (250mm × 4.6 mm × 5mm)，图中是实验条件，楼主参考一下

好的，我研究下。
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lijing320323
lijing320323
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2021/9/8 23:46:27 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
咨询工程师
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安平
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2021/9/9 9:38:17 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
如果梯度洗脱空白和溶剂空白都比较正常。

那么标品是否有问题，需要考虑。

梯度具体程序可以少做修改，降低有机相比例，降低有机相递增的速度
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