主题:【第十四届原创】韭菜与芹菜中农残能力验证经验分享

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zyl3367898
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农检联合队发表于:2021/11/09 10:15:50 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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韭菜与芹菜中农残能力验证经验分享

鹤壁市农产品检验检测中心 张艳丽

        9月份接到上级部门通知,要进行蔬菜中农残能力验证的考核,此次考核不同往年,基质是较为复杂的韭菜与芹菜,所以整个考核的难度增加,考核农药为22种,需要用到气相色谱仪、气质联用仪、液质联用仪等大型仪器,能不能一个前处理方法,三台不同仪器都能检测?如果不同仪器出的数据不同,该怎么办?这些问题本次能力验证都遇见过,总结了一下分享给大家。

        一、考核项目
      本次能力验证考核共发放A和B两组样品,A样品的基质为芹菜,B样品的基质为韭菜。考核项目范围:甲胺磷、毒死蜱、甲拌磷、三唑磷、对硫磷、异菌脲、虫螨腈、三唑酮、腐霉利、 氯氰菊酯、 联苯菊酯、 氯氟氰菊酯、氰戊菊酯、噻虫嗪、 噻虫胺、啶虫脒、多菌灵、克百威 、吡虫啉、烯酰吗啉、嘧霉胺、吡唑醚菌酯。


图1:考核样品与配好的标液。

        二、前处理过程
        每个单位发放6个样品,其中4个为考核样品,2个为干扰样品,没有空白样品。考核样品质量为25.00g,须一次性全部转移提取。
检测方法有NY/T 761-2008气相色谱法、GB23200.121-2021液相色谱-串联质谱法、GB 23200.113-2018 气相色谱-质谱法。
样品量只有25.0g,如果做不同的3个前处理,样品量是不够的。所以提取方法是一样,净化方法分开,一个用NY/T761方法,上气相色谱仪检测,一个用GB23200.121方法,上气质联用仪与液质联用仪检测。
      1.提取
      将25.0g菜样,加50.00mL乙腈,要分次清洗塑料离心管,转移至广口瓶中,在匀浆机中高速匀浆2min后用滤纸过滤,滤液收集到装有5g∽7g氯化钠的100mL具塞量筒中,收集滤液40mL∽50mL,盖上塞子,剧烈1震荡min,在室温下静置30min,使乙腈相与水相分层。


图2:提取过程

        2.净化

        2.1 NY761-2008方法:
        从100mL具塞量筒中吸取10.00mL乙腈溶液,放人150mL烧杯中,将烧杯放在80℃水浴锅上加热,杯内缓缓通入氮气或空气流,蒸发近干,加人2.0mL丙酮,盖上铝箔,备用。
        将上述备用液完全转移至15mL刻度离心管中,再用约3mL丙酮分三次冲洗烧杯,并转移至离心管,最后定容至5.0mL,在旋涡混合器上混匀,分别移入两个2mL自动进样器样品瓶中,供色谱测定。


  图3:有机磷净化过程

        从100mL具塞量筒中吸取10.00mL乙腈溶液,放人150mL烧杯中,将烧杯放在80℃水浴锅上加热,杯内缓缓通人氮气或空气流,蒸发近干,加入2.0mL正己烷,盖上铝箔,待净化。
        将弗罗里矽柱依次用5.0mL丙酮十正己烷(10+90)、5.0mL正已烷预淋洗,条件化,当溶剂液面到达柱吸附层表面时,立即倒入上述待净化溶液,用15mL刻度离心管接收洗脱液,用5mL丙酮+正己烷(10十90)冲洗烧杯后淋洗弗罗里矽柱,并重复一次。将盛有淋洗液的离心管置于氮吹仪上,在水浴温度50℃条件下,氮吹蒸发至小于5mL,用正己烷定容至5.0mL,在旋涡混合器上混匀,分别移人2mL自动进样器样品瓶中,待测。

图4:有机氯净化过程

        2.2 GB23200.121-2021方法
        从100mL具塞量筒中吸取6.0mL上清液,至PSA 400mg,C18 400mg,MgSO4 1.2g的净化管中,涡旋混匀1min,4200r/min离心5min,吸取上清液过0.22μm滤膜,分别上气相色谱仪、气质联用仪、液质联用仪等测定。



图5:GB23200.121方法的净化过程

        三、仪器条件
      1.气相色谱仪条件
      1.1仪器
      GC450气相色谱仪(天美公司),GC7890B气相色谱仪(美国安捷伦公司),都有PFPD、ECD检测器。
      1.2色谱条件
      1.2.1有机磷检测条件
      色谱柱:VF-1701MS(30m×0.25mm×0.25um);温度:80℃保持1min,以20℃速度上升到130℃,再以5℃上升到200℃,再以15℃上升到250℃,保持11min。进样体积:1uL;进样口:250℃,不分流进样;检测器300℃;进样口温度:250℃;氮气流速:30mL/min;柱流速:2mL/min;空气流速:17mL/min;氢气流速14mL/min。
      1.2.2有机氯的检测条件
      色谱柱:DB-5(30m×0.25mm×0.25um)温度:150℃保持1min,以15℃速度上升到280℃,保持10.00min。进样体积:1uL;进样口:250℃,不分流进样;检测器300℃;进样口温度:250℃,氮气流速:30mL/min;柱流速:2mL/min。
      2.气质联用仪条件
      2.1仪器
      安捷伦气质联用仪7000D,配有电子轰击源EI。
      2.2色谱条件
      色谱柱:HP-5石英毛细管柱;30m×0.25mm×0.25um,或相当者。
      程度升温:40℃保持1min,然后以40℃/min程序升温至120℃,再以5℃/min升温至240℃,再以12℃/min升温至300℃,保持6min;载气:氦气,纯度≥99.999%,流速1.0mL/min;进样口温度:280℃;进样量:1L;进样方式:不分流进样。
      2.3质谱条件
      电子轰击源:70cV;离子源温度:280℃;传输线温度:280℃;溶剂延迟:3min;MRM扫描方式。

      3.液质联用仪条件

      3.1仪器

      AB Sciex4500高效液相色谱-串联质谱仪(配有电喷雾电离(ESI)源,美国AB SCIEX公司)。
      3.2色谱条件
      色谱柱:Altantis T3柱(50mm×2.1mm,3.0um);柱温:40℃;流动相:A相为水(含0.01%甲酸(v/v)和1mM/L甲酸铵),B相为纯甲醇。
      梯度洗脱程序:0~2.0min,90%A;5.0~12min,5%A;12.1~13min,90%A;流速:0.4mL/min;进样量:1uL。


图6:流动相梯度

      3.3质谱条件
      离子源:ESI;扫描方式:正离子扫描;扫描方式:多反应监测(MRM)模式;电喷雾电压:5500V;雾化气压力:50psi;气帘气压力:30psi;辅助加热气:60psi;离子源温度:400℃;碰撞气压力:9psi。
      虫螨腈用负离子模式,扫描方式:多反应监测(MRM)模式;电喷雾电压:-4500V;雾化气压力:70psi;气帘气压力:30psi;辅助加热气:70psi;离子源温度:620℃;碰撞气压力:9psi。

图7:质谱条件

        四、标准溶液配制
      从市场上购买芹菜、韭菜,分别按NY761-2008方法、GB23200.121-2021进行前处理,得到基质。


图8:芹菜与韭菜前处理后得到的基质

      甲胺磷、毒死蜱、甲拌磷、三唑磷、对硫磷、异菌脲、三唑酮、腐霉利、 氯氰菊酯、 联苯菊酯、 氯氟氰菊酯、氰戊菊酯等标液,用芹菜、韭菜基质配成0.1ug/mL、0.2ug/mL混标,分别用气质联用仪、液质联用仪进行绘制标液模板。

图9:气质联用仪的直线

        虫螨腈、噻虫嗪、 噻虫胺、啶虫脒、多菌灵、克百威 、吡虫啉、烯酰吗啉、嘧霉胺、吡唑醚菌酯等标液,用芹菜、韭菜基质配成0.005ug/mL、0.01ug/mL、0.02ug/mL、0.05ug/mL、0.10ug/mL、0.20ug/mL。标准曲线的线性都在0.9995以上。

图10:液质联用仪的5个浓度点直线

      五、数据结果
      6个考核样品经过以上前处理后分别上3台仪器进行检测,情况如下:
      1.气相色谱仪数据
      用NY761-2008前处理方法处理后的样品,上两台气相色谱仪进行测定,发现杂峰较多,数据受干扰较大,无法得出结果。

图11:芹菜与韭菜在气相色谱仪上的色谱图

      2.气质联用仪数据
      用GB23200.121-2021前处理方法处理后的样品,上气质联用仪测定,初步判断芹菜中含有毒死蜱、腐霉利、 氯氰菊酯等3种农药,浓度为0.40mg/kg、0.30mg/kg、0.10mg/kg左右,韭菜中含有毒死蜱、异菌脲、氯氰菊酯等3种农药,浓度分别为浓度为0.30mg/kg、0.40mg/kg、0.10mg/kg左右。这6个样品的浓度稍有差异。
      3.液质联用仪数据
      用GB23200.121-2021前处理方法处理后的样品,上液质联用仪测定,初步判断芹菜中含有毒死蜱、腐霉利、 氯氰菊酯等3种农药,浓度为0.40mg/kg、0.35mg/kg、0.090mg/kg左右,韭菜中含有毒死蜱、异菌脲、氯氰菊酯、多菌灵等4种农药,浓度分别为浓度为0.35mg/kg、0.40mg/kg、0.080mg/kg、0.070mg/kg左右。这6个样品的浓度稍有差异。
      4.质控样品
      根据以上数据结果,做加标回收的质控样品,市场购买芹菜与韭菜样品,用水浸泡与清洗,破碎后进行与考核样品一样的前处理,称样后加入标液,加标量为芹菜中毒死蜱0.40mg/kg、腐霉利0.40mg/kg、氯氰菊酯0.10mg/kg,韭菜中毒死蜱0.30mg/kg、异菌脲0.40mg/kg、氯氰菊酯0.10mg/kg、多菌灵0.10mg/kg等。加标回收率为89%-103%,符合标准要求。
        配的标液与加标量一样,都用单点校正。

图12:气质联用仪的加标回收与考核样品结果


图13:液质联用仪的加标回收与考核样品结果

      六、数据上报
      配制与加标量一样的标液浓度,同时计算加标样品与考核样品,得出的数据上报,数据进行数字修约,保留三位有效数字。同时附原始记录、图谱、质控样品等。
      七、总结
      本次能力验证样品量有限,如果用不同的前处理方法,样品量不够,农药种类多,所用的仪器较多,得出的数据不相同,如何解决呢?
      1.选择合适的前处理方法
      拿到样品后,先选择前处理方法,如果选择NY761-2008方法,步骤较多,耗费时间较长,而且这样的前处理方法用气质联用仪、液质联用仪等质谱仪检测,是否合适,没做过试验,无法得出结论。如果选择GB23200.121-2021方法,适合用质谱仪,但不是气相色谱法,数据受影响。权衡两个方法的优缺点,提取用NY761-2008方法,净化用GB23200.121-2021方法。
      2.选择合适的仪器
      考核样品用NY761-2008方法处理完,上气相色谱仪检测时,发现根本无法定性,因为韭菜芹菜都属于基质复杂的样品,干扰较大,气相色谱仪不具备扣除干扰的功能,所以选择气质联用仪与液质联用仪来检测。
      3.计算出现问题
      通过配的单标与标准曲线估算出相应的数据,进行了相应浓度的加标试验,发现加标回收率全部只有50%,检查计算公式,才知最后结果乘2才行。这是因为NY761-2008的计算公式是分子分母相约后为1,色谱图上得出的数据就是最终数据,而GB23200.121-2021公式分子分母相约后为2,色谱图上的数据要乘2才是最终数据。


图14:计算公式

      4.数据不同
      在能力验证过程中,会做多次试验,用多台仪器,这样会得到多个数据结果,哪个数据是准确的?
      4.1基质不同造成数据不同
      用基质配标液很重要,对气质联用仪来说,可以减少基质增强效应,减少衬管的吸附,对液质联用仪来说,可以减少基质抑制效应,一定要选择与考核样品相同前处理方法得到的基质溶液,此次用NY761-2008方法处理后的基质配的标液,与用GB23200.121-2021方法处理后的基质配的标液,去计算同一个样品,结果相差较大。所以一定要用与考核样品一样的前处理得到的基质配标液,去计算样品含量,才是最准确的。
      4.2仪器不同造成数据不同
      气质联用仪检测得出一批数据,液质联用仪得出一批数据,这两批数据会有相同,会有不同,采用哪个数据,还是要看质控样品。质控样品的加标回收率起决定作用,比如毒死蜱的加标回收率在气质联用仪上是103%,而同一样品在液质联用仪上的加标回收率是98%,那么考核样品的结果以液质联用仪为准,同理,氯氰菊酯的加标回收率在液质联用仪上为90%,而在气质联用仪上的回收率为100%,那么考核样品的结果以气质联用仪为准。
      5.回收率折算
      在质控样品的回收率在80%-110%期间时,直接上报考核样品的数据结果,不要进行回收率折算,折算后数据可能会通不过。加标回收率在正常范围内,说明整个前处理过程与仪器条件是正常的,可以相信最后的数据结果。
      6.准备工作要充分
      拿到能力验证的通知,一定要先准备相同的基质样品,比如考核样品为韭菜与芹菜,要先购买韭菜与芹菜,进行相应的前处理,进行加标回收练习,看看哪个环节出问题。即使准备工作很充分,还会有很多变数,比如考核样品量少,前处理要进行优化,这些在考核前要考虑到,做到随机应变,应对自如。
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Last edit by zyl3367898 举报
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zyl3367898
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第一次做韭菜芹菜的能力验证,3台仪器同时开,真是很忙,也积累了不少经验。
zyl3367898
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能力验证做了十几年,一般是笋瓜与苹果,基质干净,这么复杂的基质还是第一次做。
zyl3367898
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前期准备很重要,平常有练习,心中不慌张。
vm88
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用三台仪器做能力验证,文章中还写的那么清楚,高手。
vm88
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这两种蔬菜基质复杂,要去掉干扰才能测出是哪一个,难度增加。
vm88
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如果没有质谱仪,只有气相色谱仪,很难通过。
玉国
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楼主的检测水平又上了一个台阶。
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2021/11/9 11:28:53 Last edit by Insm_9bc30435
玉国
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用质谱仪条件摸索也需要一段时间,看来前期准备很充分。
mxl2699
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这么庞大的工作量,开三台仪器,操作仪器的人也不少吧。